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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提DNA纯度要么徘徊在1.5要么大于2，甚至到5点几，求助！
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dr西小瓜

新虫 (初入文坛)

[求助] 提DNA纯度要么徘徊在1.5要么大于2，甚至到5点几，求助！ 已有4人参与

各位大神，小白现在提大肠杆菌DNA准备跑PCR的，用TAKARA DNAiso reagent，用无水乙醇后都看不到沉淀的，提了3次，10管只有一管是A260/280浮动在1.8的。我想问下——    1，百度到的对提DNA的纯度要求不一样 ，到底1.6-1.8还是1.8-2.0较好？我跑pcr的是不是不用对纯度要求那么严格？那也得有个度吧？大概多少？
             2，有谁做过类似的吗？没沉淀是因为我提的不好吗？
             3，我测纯度的时候，同一样品相差很大，舍友说因为我没混匀。我是那样想的，前面1ml枪头都要剪去2-3mm以减小剪切力对DNA的伤害，我就不敢用小枪头混匀了……怎么办啊？
             4，我要不要来个煮沸法对照一下下？煮沸法我看到大家的做法也不太一样，有谁用煮沸法提过大肠杆菌的DNA吗？我要提的大概是1KB 。
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1楼 2015-05-04 08:44:18
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WHABnew

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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5楼: Originally posted by dr西小瓜 at 2015-05-04 18:58:59
仪器是NANO2000...

好像学校用的都是这个，建议你一个样品多测两次，也算排除一个因素嘛，还有就是其实如果普通PCR对DAN纯度要求没那么高，如果还要做其他实验就不知道了
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10楼2015-05-06 17:23:45
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WHABnew

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-05 22:45:26
建议你看下测浓度的仪器，以前我们做反转测RNA浓度，测四五次浓度都不一样差别还很大，以至于最后就直接测一次算了。
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2楼2015-05-04 14:32:00
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-05 22:45:45
A260/280在1.8-2.0之间是纯度较好，高于或低于这个数字可能有酚或RNA等污染。混匀很重要，可以采用轻柔的方式混匀。祝顺利
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
3楼2015-05-04 16:58:31
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-05 22:46:05
比值是1.8-2.0比较好。如果实验目的是做PCR的话，建议不用抽提基因组，直接用菌液做模板即可。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-05-04 18:14:24
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dr西小瓜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by WHABnew at 2015-05-04 14:32:00
建议你看下测浓度的仪器，以前我们做反转测RNA浓度，测四五次浓度都不一样差别还很大，以至于最后就直接测一次算了。

仪器是NANO2000
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5楼2015-05-04 18:58:59
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dr西小瓜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangranjun at 2015-05-04 16:58:31
A260/280在1.8-2.0之间是纯度较好，高于或低于这个数字可能有酚或RNA等污染。混匀很重要，可以采用轻柔的方式混匀。祝顺利

用小枪头搅拌而不是吹打是吗？
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6楼2015-05-04 21:40:41
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dr西小瓜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by aofeng860308 at 2015-05-04 18:14:24
比值是1.8-2.0比较好。如果实验目的是做PCR的话，建议不用抽提基因组，直接用菌液做模板即可。

用菌液的量会不会很难把握？
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7楼2015-05-04 21:42:21
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主
引用回帖:
6楼: Originally posted by dr西小瓜 at 2015-05-04 21:40:41
用小枪头搅拌而不是吹打是吗？...

嗯，是的，吹打很容易剪切断……
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
8楼2015-05-04 22:26:19
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by dr西小瓜 at 2015-05-04 21:42:21
用菌液的量会不会很难把握？...

你要是扩基因，用枪头蘸点菌液就可以了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2015-05-04 23:00:37
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