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yueliangwan

铁虫 (小有名气)

[求助] DNA LADDER 检测细胞凋亡

各位虫友们好,我在做细胞凋亡时,由于药物自身荧光原因,不能用流式检测,欲用琼脂糖凝胶电泳检测(以前从未涉及到 DNA),想检测180-200bp 的ladder条带,该用多大浓度的胶啊,我看网上写的1%,就试着做了一次,结果如附件所示,(没有目的条带,而且marker 分的不是很开),后面该如何改进啊,跪求答案!

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yueliangwan

铁虫 (小有名气)

沙发我自己做了啊,另外附注镜下观察加药组和空白组有明显差异啊
2楼2012-12-14 20:03:31
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1 2012-12-15 11:53:22
跑180-200bp的胶最好用1.5%或者2%的胶,1%的是分不开的。其他的我无法回答了!
3楼2012-12-15 11:24:07
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yueliangwan

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aofeng860308 at 2012-12-15 11:24:07
跑180-200bp的胶最好用1.5%或者2%的胶,1%的是分不开的。其他的我无法回答了!

哦,谢谢啦
4楼2012-12-15 17:32:03
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richenim

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我用的是1.2%的胶,1.5%的我也试过也可以,mark分不分的开除了胶的浓度,电压也要考虑的,我一般用80V~100V。我是买的上海生工的DNA提取盒,上样量大概8~10ul。你首先要确定下你的细胞是不是发生凋亡了,如果确实有凋亡,那就考虑药物诱导时间及细胞的数量,laddder一般是出现在晚期,而且要凋亡细胞大于30%左右才能检测到的。
5楼2012-12-16 22:39:01
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yueliangwan

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by richenim at 2012-12-16 22:39:01
我用的是1.2%的胶,1.5%的我也试过也可以,mark分不分的开除了胶的浓度,电压也要考虑的,我一般用80V~100V。我是买的上海生工的DNA提取盒,上样量大概8~10ul。你首先要确定下你的细胞是不是发生凋亡了,如果确实有 ...

谢谢回复哦,我还想再请教一个问题,就是您上样时的浓度是多大啊(上样量是几纳克啊),我的在镜下观察,加药组细胞数目明显减少,而且漂浮的特别多,最后能不能麻烦您发一张您跑的图啊?不胜感激啊
6楼2012-12-17 09:01:54
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