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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » DNA LADDER 检测细胞凋亡
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yueliangwan

铁虫 (小有名气)

[求助] DNA LADDER 检测细胞凋亡

各位虫友们好，我在做细胞凋亡时，由于药物自身荧光原因，不能用流式检测，欲用琼脂糖凝胶电泳检测（以前从未涉及到 DNA),想检测180-200bp 的ladder条带，该用多大浓度的胶啊，我看网上写的1%，就试着做了一次，结果如附件所示，（没有目的条带，而且marker 分的不是很开），后面该如何改进啊，跪求答案！

药学院.jpg
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1楼 2012-12-14 19:49:54
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yueliangwan

铁虫 (小有名气)
沙发我自己做了啊，另外附注镜下观察加药组和空白组有明显差异啊
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2楼2012-12-14 20:03:31
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1 2012-12-15 11:53:22
跑180-200bp的胶最好用1.5%或者2%的胶，1%的是分不开的。其他的我无法回答了！
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3楼2012-12-15 11:24:07
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yueliangwan

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aofeng860308 at 2012-12-15 11:24:07
跑180-200bp的胶最好用1.5%或者2%的胶，1%的是分不开的。其他的我无法回答了！

哦，谢谢啦
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4楼2012-12-15 17:32:03
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richenim

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我用的是1.2%的胶，1.5%的我也试过也可以，mark分不分的开除了胶的浓度，电压也要考虑的，我一般用80V~100V。我是买的上海生工的DNA提取盒，上样量大概8~10ul。你首先要确定下你的细胞是不是发生凋亡了，如果确实有凋亡，那就考虑药物诱导时间及细胞的数量，laddder一般是出现在晚期，而且要凋亡细胞大于30%左右才能检测到的。
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5楼2012-12-16 22:39:01
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yueliangwan

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by richenim at 2012-12-16 22:39:01
我用的是1.2%的胶，1.5%的我也试过也可以，mark分不分的开除了胶的浓度，电压也要考虑的，我一般用80V~100V。我是买的上海生工的DNA提取盒，上样量大概8~10ul。你首先要确定下你的细胞是不是发生凋亡了，如果确实有 ...

谢谢回复哦，我还想再请教一个问题，就是您上样时的浓度是多大啊（上样量是几纳克啊），我的在镜下观察，加药组细胞数目明显减少，而且漂浮的特别多，最后能不能麻烦您发一张您跑的图啊？不胜感激啊
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6楼2012-12-17 09:01:54
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