应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 关于真菌的转化问题
101/1返回列表
查看: 3327  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sweetyoo0

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于真菌的转化问题 已有4人参与

敲除真菌相关的一目的基因，已构建同源整合片段已连接载体，打算提取质粒后双酶切获得片段再转化，转化时要求有10ug，浓度1ug/ul（方法与PEG介导的曲霉原生质体转化原理一样），但酶切后浓度偏低达不到，请问各位童鞋都是采用什么方法达到这个浓度，先谢谢各位啦(ಥ_ಥ

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物类

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-28 23:37:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wopopwz123

捐助贵宾 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-29 18:49:18
你如果是需要敲除基因，你可以使用PCR产物直接进行敲除，看你实验目的了。具体你可以问我，我做过真菌的原生质体转化。
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-28 23:41:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sweetyoo0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wopopwz123 at 2015-04-28 23:41:16
你如果是需要敲除基因，你可以使用PCR产物直接进行敲除，看你实验目的了。具体你可以问我，我做过真菌的原生质体转化。

pcr产物不用回收吗？产物中其他成分会影响转化吧？现在参考的转化方法与曲霉转化相似，protocol中说明原生质体100加10ug的DNA，浓度达1ug/ml，只加10ul，是不是必须按照这个比例加入呢？？我目前打算导入同源整合片段来敲出真菌中的gene，而非质粒

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-04-28 23:52:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wopopwz123

捐助贵宾 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-29 18:49:31
引用回帖:
3楼: Originally posted by sweetyoo0 at 2015-04-28 23:52:08
pcr产物不用回收吗？产物中其他成分会影响转化吧？现在参考的转化方法与曲霉转化相似，protocol中说明原生质体100加10ug的DNA，浓度达1ug/ml，只加10ul，是不是必须按照这个比例加入呢？？我目前打算导入同源整合片 ...

如果你是提取质粒我建议你用试剂盒提取，这样效果好一些。自己手提的效果不太好，会影响转化的。PCR产物需要回收的，然后再进行转化。如果是敲除两种方法都可以试试。
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-29 00:29:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sweetyoo0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wopopwz123 at 2015-04-29 00:29:48
如果你是提取质粒我建议你用试剂盒提取，这样效果好一些。自己手提的效果不太好，会影响转化的。PCR产物需要回收的，然后再进行转化。如果是敲除两种方法都可以试试。...

但是pcr回收后浓度很低，达不到要求浓度，请问你是用多少浓度，多少量的DNA做得转化呢？？谢谢~

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2015-04-29 08:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zbl217

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是用什么方法转化？
赞一下 回复此楼
6楼2015-05-20 17:41:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

混合配搭

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好,我也刚做请问你是怎么构建的载体啊？
赞一下 回复此楼
7楼2015-07-09 17:22:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

混合配搭

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by wopopwz123 at 2015-04-28 23:41:16
你如果是需要敲除基因，你可以使用PCR产物直接进行敲除，看你实验目的了。具体你可以问我，我做过真菌的原生质体转化。

你好，怎么构建基因敲除的载体啊？我没有想敲除这个基因的全长，是不是得先提DNA扩增全长才能设计引物和载体啊？
赞一下 回复此楼
8楼2015-07-09 17:24:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wopopwz123

捐助贵宾 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 混合配搭 at 2015-07-09 17:24:24
你好，怎么构建基因敲除的载体啊？我没有想敲除这个基因的全长，是不是得先提DNA扩增全长才能设计引物和载体啊？...

你打算做部分敲除？
赞一下 回复此楼
9楼2015-07-09 23:03:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liz_xin7

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by wopopwz123 at 2015-04-28 23:41:16
你如果是需要敲除基因，你可以使用PCR产物直接进行敲除，看你实验目的了。具体你可以问我，我做过真菌的原生质体转化。

你好，我想问下，我现在用PEG介导的曲霉原生质体转化的方法转化曲霉菌，但是已经做了4个月了，其中又更换过各种条件 ，一直没有长出克隆来，想请教下，可能的造成这样情况的原因有哪些，谢谢
赞一下 回复此楼
10楼2018-12-14 10:44:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sweetyoo0 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 Qj98d49dHFb9 2026-08-25 5/250 2026-08-26 04:57 by cNXvBfCpiZOM
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 7K1CJE38xLG4 2026-08-25 4/200 2026-08-26 02:04 by cNXvBfCpiZOM
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +18 angus9576 2026-08-25 22/1100 2026-08-26 00:41 by merchancy
[基金申请] 有没有大神帮我看看基金代码 28+4 1234567wang 2026-08-24 10/500 2026-08-25 19:15 by lfy8008
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +20 羊腰板 2026-08-21 23/1150 2026-08-25 16:34 by zsna
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭