应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 关于真菌的转化问题
51/1返回列表
查看: 3337  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sweetyoo0

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于真菌的转化问题 已有4人参与

敲除真菌相关的一目的基因，已构建同源整合片段已连接载体，打算提取质粒后双酶切获得片段再转化，转化时要求有10ug，浓度1ug/ul（方法与PEG介导的曲霉原生质体转化原理一样），但酶切后浓度偏低达不到，请问各位童鞋都是采用什么方法达到这个浓度，先谢谢各位啦(ಥ_ಥ

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物类

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-28 23:37:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liz_xin7

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by wopopwz123 at 2015-04-28 23:41:16
你如果是需要敲除基因，你可以使用PCR产物直接进行敲除，看你实验目的了。具体你可以问我，我做过真菌的原生质体转化。

你好，我想问下，我现在用PEG介导的曲霉原生质体转化的方法转化曲霉菌，但是已经做了4个月了，其中又更换过各种条件 ，一直没有长出克隆来，想请教下，可能的造成这样情况的原因有哪些，谢谢
赞一下 回复此楼
10楼2018-12-14 10:44:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

wopopwz123

捐助贵宾 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-29 18:49:18
你如果是需要敲除基因，你可以使用PCR产物直接进行敲除，看你实验目的了。具体你可以问我，我做过真菌的原生质体转化。
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-28 23:41:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sweetyoo0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wopopwz123 at 2015-04-28 23:41:16
你如果是需要敲除基因，你可以使用PCR产物直接进行敲除，看你实验目的了。具体你可以问我，我做过真菌的原生质体转化。

pcr产物不用回收吗？产物中其他成分会影响转化吧？现在参考的转化方法与曲霉转化相似，protocol中说明原生质体100加10ug的DNA，浓度达1ug/ml，只加10ul，是不是必须按照这个比例加入呢？？我目前打算导入同源整合片段来敲出真菌中的gene，而非质粒

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-04-28 23:52:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wopopwz123

捐助贵宾 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-29 18:49:31
引用回帖:
3楼: Originally posted by sweetyoo0 at 2015-04-28 23:52:08
pcr产物不用回收吗？产物中其他成分会影响转化吧？现在参考的转化方法与曲霉转化相似，protocol中说明原生质体100加10ug的DNA，浓度达1ug/ml，只加10ul，是不是必须按照这个比例加入呢？？我目前打算导入同源整合片 ...

如果你是提取质粒我建议你用试剂盒提取，这样效果好一些。自己手提的效果不太好，会影响转化的。PCR产物需要回收的，然后再进行转化。如果是敲除两种方法都可以试试。
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-29 00:29:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-30 13:23 by xiangy672
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +3 雨打竹帘 2026-08-30 4/200 2026-08-30 12:35 by 白大多亮
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[考博] 找导师 +5 yuanjiabao 2026-08-29 6/300 2026-08-30 11:52 by zhouyanli11
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 11:51 by l0VvVHGBGRLv
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:41 by l0VvVHGBGRLv
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:10 by l0VvVHGBGRLv
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:07 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 06:11 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 01:03 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭