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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 蛋白纯化问题，急急急
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hj2013china

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化问题，急急急 已有2人参与

蛋白纯化平衡液里咪唑是起什么作用的？蛋白挂柱后，我用平衡液10mM咪唑能洗脱蛋白，考虑能不加咪唑吗？求助
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1楼 2015-04-27 10:12:54
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
。。。开玩笑的吧，不加咪唑怎么洗蛋白？咪唑的作用是竞争his-tag跟镍柱结合，因为咪唑比起histag，具有更强的结合金属离子（镍，铜，锌）的能力，因此用于histag蛋白纯化的洗脱。不过你为什么不想用咪唑啊？
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-04-27 13:24:17
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jytanji

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hj2013china: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2015-05-08 09:45:59
平衡液中加入低浓度咪唑是为了减少一些杂蛋白的挂柱现象，提高目的蛋白的纯化效率，自然你也可以不加，如果你目的蛋白挂柱效果不好的话你不加也行，只要最后在洗脱buffer中加高浓度咪唑洗脱目的蛋白就行，只是可能洗脱蛋白就有点杂了，低浓度咪唑是可以起到洗杂作用的。
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3楼2015-04-27 14:23:32
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hj2013china

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-04-27 13:24:17
。。。开玩笑的吧，不加咪唑怎么洗蛋白？咪唑的作用是竞争his-tag跟镍柱结合，因为咪唑比起histag，具有更强的结合金属离子（镍，铜，锌）的能力，因此用于histag蛋白纯化的洗脱。不过你为什么不想用咪唑啊？...

我是用平衡液平衡，不是用于洗脱
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4楼2015-05-08 09:45:30
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