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hj2013china

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化问题,急急急 已有2人参与

蛋白纯化平衡液里咪唑是起什么作用的?蛋白挂柱后,我用平衡液10mM咪唑能洗脱蛋白,考虑能不加咪唑吗?求助
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
。。。开玩笑的吧,不加咪唑怎么洗蛋白?咪唑的作用是竞争his-tag跟镍柱结合,因为咪唑比起histag,具有更强的结合金属离子(镍,铜,锌)的能力,因此用于histag蛋白纯化的洗脱。不过你为什么不想用咪唑啊?
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
2楼2015-04-27 13:24:17
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jytanji

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hj2013china: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2015-05-08 09:45:59
平衡液中加入低浓度咪唑是为了减少一些杂蛋白的挂柱现象,提高目的蛋白的纯化效率,自然你也可以不加,如果你目的蛋白挂柱效果不好的话你不加也行,只要最后在洗脱buffer中加高浓度咪唑洗脱目的蛋白就行,只是可能洗脱蛋白就有点杂了,低浓度咪唑是可以起到洗杂作用的。
3楼2015-04-27 14:23:32
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hj2013china

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-04-27 13:24:17
。。。开玩笑的吧,不加咪唑怎么洗蛋白?咪唑的作用是竞争his-tag跟镍柱结合,因为咪唑比起histag,具有更强的结合金属离子(镍,铜,锌)的能力,因此用于histag蛋白纯化的洗脱。不过你为什么不想用咪唑啊?...

我是用平衡液平衡,不是用于洗脱
4楼2015-05-08 09:45:30
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