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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何去除引物二聚体
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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠

[求助] 如何去除引物二聚体已有5人参与

做荧光定量PCR，在主峰前边出现一小峰，如何消除这个小峰？这个小峰不是很大，如果没有这个小峰，我的图就很完美了。
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1楼2015-04-24 06:56:02
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
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飞走的希望: 金币+2 2015-04-24 09:18:35
使用特异性高的Taq酶扩增，图会非常清晰，但得保证你反应体系中其他东西的质量，热启动酶可以尝试
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-04-24 08:59:22
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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠
引用回帖:
2楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-04-24 08:59:22
使用特异性高的Taq酶扩增，图会非常清晰，但得保证你反应体系中其他东西的质量，热启动酶可以尝试...

你是说需要换酶吗？塔克拉公司的酶呢？我用的这个，我在想先提高退火温度，在做一下。有人说提高退火温度可以降低引物二聚体的影响。
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3楼2015-04-24 09:20:02
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WHABnew

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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飞走的希望: 金币+2 2015-04-25 07:18:09
建议提高退火温度试一下，这是一个消除引物二聚体的办法，还有就是降低引物用量，如果引物二聚体比较弱的话对对定量结果影响不大，数据可以用。你说的峰是熔解曲线么？？可能是带入污染了，建议重做一次，如果还是这样可能得重新设计引物
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4楼2015-04-24 10:27:31
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
飞走的希望: 金币+2 2015-04-25 07:18:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞走的希望 at 2015-04-24 09:20:02
你是说需要换酶吗？塔克拉公司的酶呢？我用的这个，我在想先提高退火温度，在做一下。有人说提高退火温度可以降低引物二聚体的影响。...

恩恩，是可以的，从退火温度入手看看，takara的酶也是不错的，但是还是建议热启动型的酶，扩增没有非特异性产物
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
5楼2015-04-24 13:19:32
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liubolin945

铁虫 (小有名气)

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★ ★
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飞走的希望: 金币+2 2015-04-26 13:12:08
如何去除引物二聚体

我用的 是 RR420A
普通PCR  电泳看不到二聚体，但是定量上就能看到这个小峰。
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QQ：277046172
6楼2015-04-26 08:49:45
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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠
引用回帖:
6楼: Originally posted by liubolin945 at 2015-04-26 08:49:45
我用的 是 RR420A
普通PCR  电泳看不到二聚体，但是定量上就能看到这个小峰。

你是怎么消除的？
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7楼2015-04-26 13:11:58
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墨尔本机器

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
7楼: Originally posted by 飞走的希望 at 2015-04-26 13:11:58
你是怎么消除的？...

重新设计引物吧，一般不好消除了的
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8楼2015-04-26 16:04:11
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liubolin945

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 飞走的希望 at 2015-04-26 13:11:58
你是怎么消除的？...

就是温度提高一下啊，没消除啊，定量机器上看得见，电泳看不见
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QQ：277046172
9楼2015-04-26 18:18:14
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zhangquan084

木虫 (正式写手)

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一般不好消除，如果想消除，提高退火温度，降低引物量，试下呗!
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生而不息，奋斗不止！
10楼2015-04-27 16:25:20
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