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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠

[求助] 如何去除引物二聚体 已有5人参与

做荧光定量PCR,在主峰前边出现一小峰,如何消除这个小峰?这个小峰不是很大,如果没有这个小峰,我的图就很完美了。
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飞走的希望: 金币+2 2015-04-24 09:18:35
使用特异性高的Taq酶扩增,图会非常清晰,但得保证你反应体系中其他东西的质量,热启动酶可以尝试
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-04-24 08:59:22
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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠

引用回帖:
2楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-04-24 08:59:22
使用特异性高的Taq酶扩增,图会非常清晰,但得保证你反应体系中其他东西的质量,热启动酶可以尝试...

你是说需要换酶吗?塔克拉公司的酶呢?我用的这个,我在想先提高退火温度,在做一下。有人说提高退火温度可以降低引物二聚体的影响。
3楼2015-04-24 09:20:02
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WHABnew

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飞走的希望: 金币+2 2015-04-25 07:18:09
建议提高退火温度试一下,这是一个消除引物二聚体的办法,还有就是降低引物用量,如果引物二聚体比较弱的话对对定量结果影响不大,数据可以用。你说的峰是熔解曲线么??可能是带入污染了,建议重做一次,如果还是这样可能得重新设计引物
4楼2015-04-24 10:27:31
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
飞走的希望: 金币+2 2015-04-25 07:18:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞走的希望 at 2015-04-24 09:20:02
你是说需要换酶吗?塔克拉公司的酶呢?我用的这个,我在想先提高退火温度,在做一下。有人说提高退火温度可以降低引物二聚体的影响。...

恩恩,是可以的,从退火温度入手看看,takara的酶也是不错的,但是还是建议热启动型的酶,扩增没有非特异性产物
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
5楼2015-04-24 13:19:32
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liubolin945

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飞走的希望: 金币+2 2015-04-26 13:12:08
如何去除引物二聚体

我用的 是 RR420A
普通PCR  电泳看不到二聚体,但是定量上就能看到这个小峰。
QQ:277046172
6楼2015-04-26 08:49:45
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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠

引用回帖:
6楼: Originally posted by liubolin945 at 2015-04-26 08:49:45
我用的 是 RR420A
普通PCR  电泳看不到二聚体,但是定量上就能看到这个小峰。

你是怎么消除的?
7楼2015-04-26 13:11:58
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墨尔本机器

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by 飞走的希望 at 2015-04-26 13:11:58
你是怎么消除的?...

重新设计引物吧,一般不好消除了的
8楼2015-04-26 16:04:11
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liubolin945

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 飞走的希望 at 2015-04-26 13:11:58
你是怎么消除的?...

就是温度提高一下啊,没消除啊,定量机器上看得见,电泳看不见
QQ:277046172
9楼2015-04-26 18:18:14
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zhangquan084

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一般不好消除,如果想消除,提高退火温度,降低引物量,试下呗!
生而不息,奋斗不止!
10楼2015-04-27 16:25:20
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