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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠

[求助] 如何去除引物二聚体 已有5人参与

做荧光定量PCR,在主峰前边出现一小峰,如何消除这个小峰?这个小峰不是很大,如果没有这个小峰,我的图就很完美了。
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WHABnew

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飞走的希望: 金币+2 2015-04-25 07:18:09
建议提高退火温度试一下,这是一个消除引物二聚体的办法,还有就是降低引物用量,如果引物二聚体比较弱的话对对定量结果影响不大,数据可以用。你说的峰是熔解曲线么??可能是带入污染了,建议重做一次,如果还是这样可能得重新设计引物
4楼2015-04-24 10:27:31
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查看全部 10 个回答

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飞走的希望: 金币+2 2015-04-24 09:18:35
使用特异性高的Taq酶扩增,图会非常清晰,但得保证你反应体系中其他东西的质量,热启动酶可以尝试
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-04-24 08:59:22
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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠

引用回帖:
2楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-04-24 08:59:22
使用特异性高的Taq酶扩增,图会非常清晰,但得保证你反应体系中其他东西的质量,热启动酶可以尝试...

你是说需要换酶吗?塔克拉公司的酶呢?我用的这个,我在想先提高退火温度,在做一下。有人说提高退火温度可以降低引物二聚体的影响。
3楼2015-04-24 09:20:02
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
飞走的希望: 金币+2 2015-04-25 07:18:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞走的希望 at 2015-04-24 09:20:02
你是说需要换酶吗?塔克拉公司的酶呢?我用的这个,我在想先提高退火温度,在做一下。有人说提高退火温度可以降低引物二聚体的影响。...

恩恩,是可以的,从退火温度入手看看,takara的酶也是不错的,但是还是建议热启动型的酶,扩增没有非特异性产物
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
5楼2015-04-24 13:19:32
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