| 查看: 2254 | 回复: 25 | |||
[交流]
新人第一帖，关于原核表达蛋白后，纯化策略问题。希望大神帮助！谢谢！
|
|||
最近好不容易表达出蛋白，进入纯化。载体用的pET-32a，有his标签，前几天第一次摇了500ml，尝试挂了ni柱。洗脱下来后跑了电泳。结果如下： ![\"新人第一帖，关于原核表达蛋白后，纯化策略问题。希望大神帮助！谢谢！-1\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2015/0423/bw166h3420783_1429756563_315.jpg#opennewwindow\") 蛋白泳道从左到右依次是：1.M 2.破碎后蛋白上清原液 3.流穿 4.洗脱 5-10分别是20,50,100,200,500mM以及1M咪唑洗脱 maker 从上到下分别是116,66,45,35,25,18,14. 可以看到在50和100mM咪唑浓度时，我的蛋白有被大量洗脱下来。 但是现在问题来了，染色之后虽然我的蛋白条带比较明显，但是杂蛋白感觉也不少。洗脱和20mM浓度时都没有冲下来很多杂蛋白。 最近收了大量的蛋白。过柱子的话，我是不是应该用20mM咪唑多洗几个柱体积？或者在50mM多洗，希望100mM时就能得到较纯的蛋白？ 我也想过用分子筛，但是50,100mM泳道的杂蛋白和表达蛋白好像分子量差别不大，分子筛是不是不容易分开呢？ 又或者用离子交换或者其他？希望各位能够帮我分析一下。谢谢各位！ |
回复此楼» 猜你喜欢
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有124人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白纯化问题，过一次镍柱，又过一次DEAE后依然有杂带，该如何进一步纯化？
已经有6人回复
- 蛋白原核表达和包涵体纯化问题
已经有8人回复
- 原核表达蛋白纯化
已经有32人回复
- 求助！关于GST标签蛋白纯化问题~！
已经有3人回复
- 跨膜蛋白原核表达、纯化
已经有10人回复
- 新人发帖：求助关于联陪资助资金问题，谢谢！
已经有13人回复
- 关于Hs tag 蛋白纯化后蛋白不纯的问题
已经有6人回复
- 蛋白表达、纯化、活性检测和相关药理学实验，求推荐英文杂志，谢谢！！
已经有7人回复
- 求助各位大神关于含组氨酸标签蛋白纯化的问题
已经有8人回复
- （第一次发帖）关于土壤淋洗实验的多个问题，希望大家能帮一下,谢谢。
已经有13人回复
- 关于用Ni-NTA His.bind树脂纯化原核表达蛋白
已经有16人回复
- 进行羟胺裂解后，进行蛋白的二次过亲和层析住纯化问题！！！！求助啊 ！！！
已经有9人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化后透析及浓缩问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
水天之边
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1294.7
- 红花: 7
- 帖子: 105
- 在线: 55.8小时
- 虫号: 368503
- 注册: 2007-05-11
- 专业: 生物大分子结构与功能
7楼2015-04-25 23:18:09
mataomatao
禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
yejunhong: 金币+2 2015-04-25 10:30:21
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
yejunhong: 金币+2 2015-04-25 10:30:21
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2015-04-24 21:19:02
3楼2015-04-25 10:31:04
mataomatao
禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2015-04-25 11:39:13
阿Q~~
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 77 (初中生)
- 金币: 33343.6
- 红花: 107
- 帖子: 36186
- 在线: 1028.1小时
- 虫号: 3237212
- 注册: 2014-05-27
- 性别: MM
- 专业: 宇宙学
5楼2015-04-25 11:49:17
 |
6楼2015-04-25 12:34:19
aofeng860308
木虫 (正式写手)
- 应助: 53 (初中生)
- 金币: 3661.4
- 散金: 145
- 红花: 5
- 帖子: 497
- 在线: 531.1小时
- 虫号: 938003
- 注册: 2010-01-06
- 性别: GG
- 专业: 环境分析化学
8楼2015-04-26 02:46:15
9楼2015-04-26 10:29:49
10楼2015-04-27 15:14:46
10