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[交流]
新人第一帖，关于原核表达蛋白后，纯化策略问题。希望大神帮助！谢谢！
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最近好不容易表达出蛋白，进入纯化。载体用的pET-32a，有his标签，前几天第一次摇了500ml，尝试挂了ni柱。洗脱下来后跑了电泳。结果如下： ![\"新人第一帖，关于原核表达蛋白后，纯化策略问题。希望大神帮助！谢谢！-1\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2015/0423/bw166h3420783_1429756563_315.jpg#opennewwindow\") 蛋白泳道从左到右依次是：1.M 2.破碎后蛋白上清原液 3.流穿 4.洗脱 5-10分别是20,50,100,200,500mM以及1M咪唑洗脱 maker 从上到下分别是116,66,45,35,25,18,14. 可以看到在50和100mM咪唑浓度时，我的蛋白有被大量洗脱下来。 但是现在问题来了，染色之后虽然我的蛋白条带比较明显，但是杂蛋白感觉也不少。洗脱和20mM浓度时都没有冲下来很多杂蛋白。 最近收了大量的蛋白。过柱子的话，我是不是应该用20mM咪唑多洗几个柱体积？或者在50mM多洗，希望100mM时就能得到较纯的蛋白？ 我也想过用分子筛，但是50,100mM泳道的杂蛋白和表达蛋白好像分子量差别不大，分子筛是不是不容易分开呢？ 又或者用离子交换或者其他？希望各位能够帮我分析一下。谢谢各位！ |
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aofeng860308
木虫 (正式写手)
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8楼2015-04-26 02:46:15
mataomatao
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yejunhong: 金币+2 2015-04-25 10:30:21
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mataomatao
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4楼2015-04-25 11:39:13
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