应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 新人第一帖，关于原核表达蛋白后，纯化策略问题。希望大神帮助！谢谢！
262/3返回列表上一页123下一页
查看: 2218  |  回复: 25
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
后边加上离子柱和分子筛，妥妥的搞定
赞一下 回复此楼
11楼2015-04-27 15:24:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

virologik
12楼2015-04-27 15:25:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

8wangle
13楼2015-04-27 15:46:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yejunhong

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 水天之边 at 2015-04-25 23:18:09
20或者30 mM咪唑狂wash，差不多10-20个柱体积，洗到没有蛋白流出，检测的方法有 1:Bradford检测不显色；2:nanodrop测没浓度；3:紫外测没吸收。然后再用100或者200的咪唑洗脱蛋白。但是如果你的条带下面的带是你蛋白 ...

会不会是二硫键折叠错误导致的条带不单一呢？
今天重新过柱了。跑着胶。今天就洗了20个柱体积。希望有效果。
赞一下 回复此楼
14楼2015-04-27 22:18:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yejunhong

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 3q2002 at 2015-04-26 10:29:49
这种结果已经很好
一个Ni柱子不可能解决所有问题。
珍惜时间，做下一步实验。

那我接下来就过分子筛或者离子交换。希望能有好结果。
赞一下 回复此楼
15楼2015-04-27 22:20:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yejunhong

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jytanji at 2015-04-27 15:14:46
后边加上离子柱和分子筛，妥妥的搞定。

大小相近的蛋白，分子筛是不是不好分开啊？
赞一下 回复此楼
16楼2015-04-27 22:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jytanji

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by yejunhong at 2015-04-27 22:22:49
大小相近的蛋白，分子筛是不是不好分开啊？...

所以先过离子柱啊。
赞一下 回复此楼
17楼2015-04-28 09:55:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

3q2002

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by yejunhong at 2015-04-27 22:20:19
那我接下来就过分子筛或者离子交换。希望能有好结果。...

不建议做分子筛。效率太低。而且分子筛保存麻烦。
可以考虑离子交换。但是一般先离子交换后再上Ni柱子。否则，脱盐麻烦。顺序要颠倒一下。
赞一下 回复此楼
18楼2015-04-28 10:57:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yejunhong

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by jytanji at 2015-04-28 09:55:39
所以先过离子柱啊。...

我的蛋白10kd，pET32a标签蛋白有20kd，所以条带出现在30kd，我可不可以这样做：
30kd的蛋白过分子筛，去掉了10kd的杂蛋白，然后我切标签，我的蛋白就在10kd，反向又去掉了30kd的杂蛋白。
或者这样。因为杂蛋白应该是有类似组氨酸结构，我切去标签以后，我的蛋白就没有组氨酸标签了，我再过一次ni柱，杂蛋白反倒都挂上去了，我的蛋白在流穿里出来。
赞一下 回复此楼
19楼2015-04-28 11:48:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yejunhong

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 3q2002 at 2015-04-28 10:57:03
不建议做分子筛。效率太低。而且分子筛保存麻烦。
可以考虑离子交换。但是一般先离子交换后再上Ni柱子。否则，脱盐麻烦。顺序要颠倒一下。...

分子筛我们实验室倒是有现成的。我就是怕分子筛分辨率不太好。
我考虑用我回复楼上的那些方法，能不能帮我看看可行不？
赞一下 回复此楼
20楼2015-04-28 11:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yejunhong 的主题更新
262/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:14 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:04 by k06BKNblrGRH
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-17 03:38 by k06BKNblrGRH
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-17 02:26 by Tql5LQhh5rLK
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-17 02:26 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-17 02:14 by Tql5LQhh5rLK
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-17 01:26 by Tql5LQhh5rLK
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 i3KBRD19ERkG 2026-09-16 3/150 2026-09-17 00:50 by Tql5LQhh5rLK
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-16 22:52 by Tql5LQhh5rLK
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 14:39 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-16 14:27 by i3KBRD19ERkG
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 3/150 2026-09-16 06:51 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 3/150 2026-09-16 06:48 by LH5NkK5Ud4bh
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:59 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:26 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭