应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 新人第一帖，关于原核表达蛋白后，纯化策略问题。希望大神帮助！谢谢！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
262/3返回列表上一页123下一页
查看: 1883  |  回复: 25
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
后边加上离子柱和分子筛，妥妥的搞定
赞一下 回复此楼
11楼2015-04-27 15:24:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

virologik
12楼2015-04-27 15:25:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

8wangle
13楼2015-04-27 15:46:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yejunhong

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 水天之边 at 2015-04-25 23:18:09
20或者30 mM咪唑狂wash，差不多10-20个柱体积，洗到没有蛋白流出，检测的方法有 1:Bradford检测不显色；2:nanodrop测没浓度；3:紫外测没吸收。然后再用100或者200的咪唑洗脱蛋白。但是如果你的条带下面的带是你蛋白 ...

会不会是二硫键折叠错误导致的条带不单一呢？
今天重新过柱了。跑着胶。今天就洗了20个柱体积。希望有效果。
赞一下 回复此楼
14楼2015-04-27 22:18:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yejunhong

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 3q2002 at 2015-04-26 10:29:49
这种结果已经很好
一个Ni柱子不可能解决所有问题。
珍惜时间，做下一步实验。

那我接下来就过分子筛或者离子交换。希望能有好结果。
赞一下 回复此楼
15楼2015-04-27 22:20:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yejunhong

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jytanji at 2015-04-27 15:14:46
后边加上离子柱和分子筛，妥妥的搞定。

大小相近的蛋白，分子筛是不是不好分开啊？
赞一下 回复此楼
16楼2015-04-27 22:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jytanji

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by yejunhong at 2015-04-27 22:22:49
大小相近的蛋白，分子筛是不是不好分开啊？...

所以先过离子柱啊。
赞一下 回复此楼
17楼2015-04-28 09:55:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

3q2002

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by yejunhong at 2015-04-27 22:20:19
那我接下来就过分子筛或者离子交换。希望能有好结果。...

不建议做分子筛。效率太低。而且分子筛保存麻烦。
可以考虑离子交换。但是一般先离子交换后再上Ni柱子。否则，脱盐麻烦。顺序要颠倒一下。
赞一下 回复此楼
18楼2015-04-28 10:57:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yejunhong

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by jytanji at 2015-04-28 09:55:39
所以先过离子柱啊。...

我的蛋白10kd，pET32a标签蛋白有20kd，所以条带出现在30kd，我可不可以这样做：
30kd的蛋白过分子筛，去掉了10kd的杂蛋白，然后我切标签，我的蛋白就在10kd，反向又去掉了30kd的杂蛋白。
或者这样。因为杂蛋白应该是有类似组氨酸结构，我切去标签以后，我的蛋白就没有组氨酸标签了，我再过一次ni柱，杂蛋白反倒都挂上去了，我的蛋白在流穿里出来。
赞一下 回复此楼
19楼2015-04-28 11:48:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yejunhong

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 3q2002 at 2015-04-28 10:57:03
不建议做分子筛。效率太低。而且分子筛保存麻烦。
可以考虑离子交换。但是一般先离子交换后再上Ni柱子。否则，脱盐麻烦。顺序要颠倒一下。...

分子筛我们实验室倒是有现成的。我就是怕分子筛分辨率不太好。
我考虑用我回复楼上的那些方法，能不能帮我看看可行不？
赞一下 回复此楼
20楼2015-04-28 11:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yejunhong 的主题更新
262/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +3 电气300求调剂不 2026-04-08 4/200 2026-04-08 08:58 by 蓝云思雨
[考研] 277、学硕，求调剂 数一104， +11 瓶子PZ 2026-04-07 12/600 2026-04-07 23:30 by 一只好果子?
[考研] 081700学硕，323分，一志愿中国海洋大学求调剂学校 +19 披星河 2026-04-04 19/950 2026-04-07 15:00 by 上岸快快
[考研] 328求调剂 +4 ghhh88888 2026-04-06 5/250 2026-04-07 14:45 by ghhh88888
[硕博家园] 0856材料化工求调剂，一志愿211，初试成绩349 +4 江淮北月 2026-04-05 4/200 2026-04-06 22:44 by chenzhimin
[考研] 071000生物学调剂 +7 拉提桃 2026-04-06 7/350 2026-04-06 18:55 by 52305043001
[考研] 085405软件工程301分求调剂，专硕可跨专业，四六级已过 +3 静静想想 2026-04-05 3/150 2026-04-06 15:23 by nepu_uu
[考研] 281求调剂 +8 椰子蘑菇 2026-04-06 8/400 2026-04-06 10:38 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +13 努力奋斗112 2026-04-04 13/650 2026-04-06 07:13 by jj987
[考研] 331求调剂 +8 于征yz 2026-04-05 8/400 2026-04-06 00:54 by fmesaito
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:13 by 啵啵啵0119
[考研] 085602调剂 初试总分335 +12 19123253302 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:08 by 544594351
[考研] 26考研调剂0710 0860 +9 补补不补 2026-04-03 14/700 2026-04-04 23:32 by 果冻大王
[考研] 296材料专硕求调剂 +21 202451007219 2026-04-02 22/1100 2026-04-04 21:48 by hemengdong
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 20:49 by 蓝云思雨
[考研] 334求调剂 +8 曾仰之 2026-04-03 8/400 2026-04-04 11:16 by w_xuqing
[考研] 考研求调剂 +3 木心想继续深造 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:56 by 啵啵啵0119
[考研] 化学070300-总分378-求调剂 +5 挪椅子的泡泡糖 2026-04-02 5/250 2026-04-02 22:20 by ZXlzxl0425
[考研] 0710生物学求调剂 +9 manman511 2026-04-01 9/450 2026-04-02 10:00 by zxl830724
[考研] 353求调剂 +4 拉钩不许变 2026-04-01 4/200 2026-04-01 18:10 by 记事本2026
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭