| 查看: 1732 | 回复: 25 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
新人第一帖，关于原核表达蛋白后，纯化策略问题。希望大神帮助！谢谢！
|
|||
最近好不容易表达出蛋白，进入纯化。载体用的pET-32a，有his标签，前几天第一次摇了500ml，尝试挂了ni柱。洗脱下来后跑了电泳。结果如下： ![\"新人第一帖，关于原核表达蛋白后，纯化策略问题。希望大神帮助！谢谢！-1\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2015/0423/bw166h3420783_1429756563_315.jpg#opennewwindow\") 蛋白泳道从左到右依次是：1.M 2.破碎后蛋白上清原液 3.流穿 4.洗脱 5-10分别是20,50,100,200,500mM以及1M咪唑洗脱 maker 从上到下分别是116,66,45,35,25,18,14. 可以看到在50和100mM咪唑浓度时，我的蛋白有被大量洗脱下来。 但是现在问题来了，染色之后虽然我的蛋白条带比较明显，但是杂蛋白感觉也不少。洗脱和20mM浓度时都没有冲下来很多杂蛋白。 最近收了大量的蛋白。过柱子的话，我是不是应该用20mM咪唑多洗几个柱体积？或者在50mM多洗，希望100mM时就能得到较纯的蛋白？ 我也想过用分子筛，但是50,100mM泳道的杂蛋白和表达蛋白好像分子量差别不大，分子筛是不是不容易分开呢？ 又或者用离子交换或者其他？希望各位能够帮我分析一下。谢谢各位！ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有270人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
蛋白纯化问题，过一次镍柱，又过一次DEAE后依然有杂带，该如何进一步纯化？
已经有6人回复- 蛋白原核表达和包涵体纯化问题
已经有8人回复
- 原核表达蛋白纯化
已经有32人回复
- 求助！关于GST标签蛋白纯化问题~！
已经有3人回复
- 跨膜蛋白原核表达、纯化
已经有10人回复
- 新人发帖：求助关于联陪资助资金问题，谢谢！
已经有13人回复
- 关于Hs tag 蛋白纯化后蛋白不纯的问题
已经有6人回复
- 蛋白表达、纯化、活性检测和相关药理学实验，求推荐英文杂志，谢谢！！
已经有7人回复
- 求助各位大神关于含组氨酸标签蛋白纯化的问题
已经有8人回复
- （第一次发帖）关于土壤淋洗实验的多个问题，希望大家能帮一下,谢谢。
已经有13人回复
- 关于用Ni-NTA His.bind树脂纯化原核表达蛋白
已经有16人回复
- 进行羟胺裂解后，进行蛋白的二次过亲和层析住纯化问题！！！！求助啊 ！！！
已经有9人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化后透析及浓缩问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
 |
6楼2015-04-25 12:34:19