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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 真菌ITS保守序列PCR无条带
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DZQ196536

新虫 (初入文坛)

[交流] 真菌ITS保守序列PCR无条带已有3人参与

如题，我最近做真菌菌种鉴定，利用ITS1和ITS4作引物来扩增保守序列，然后测序，在genebank进行比对。但在做PCR的过程中，总有些菌无条带，不知道是哪里的问题。我提取基因组DNA用的快提法，即核酸提取仪破碎，除蛋白直接用上清液做模板。PCR应该没问题，所做真菌包括青霉菌，曲霉等。求各位大神解答。
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1楼2015-04-21 19:56:48
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木子君君

新虫 (初入文坛)
★
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我也是，做的混菌，用的引物是ITS4，扩增不出条带，好难受，你现在解决了吗问题
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4楼2021-10-21 11:08:10
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林夕0825

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也在做真菌鉴定，可是用ITS1和ITS4扩增出来的条带然后比对，可是所有的相似度都是99%甚至有些都是100%的，到底该确定那个才是我的这个菌呢？
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2楼2015-05-12 10:06:42
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IPCAAS

新虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 林夕0825 at 2015-05-12 10:06:42
我也在做真菌鉴定，可是用ITS1和ITS4扩增出来的条带然后比对，可是所有的相似度都是99%甚至有些都是100%的，到底该确定那个才是我的这个菌呢？

首先从形态学上菌落颜色，气生菌丝的特征以及子实体和分生孢子的形态上观察，判别病菌的种类，再结合ITS序列比对，找相似性99-100%以上的而且种类最多的种，最好再扩增真菌的其他基因片段进行验证，比如BT，EF1α基因等等。
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3楼2015-06-09 15:53:43
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