应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 小片段DNA双链 PCR合成
91/1返回列表
查看: 1609  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

你太善良

新虫 (著名写手)

[交流] 小片段DNA双链 PCR合成 已有7人参与

各位大神大家好，我最近在构建一个含有随机片段的DNA文库，
设计了一个GGCTAGTCGTACGATNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNCTGCATCTGCT的模板连，
和一小段引物CCGATCAGCATGCT，使用PCR扩增形成双链，我的条件是这样的
体系：模板5ug
          引物15ug
           taq酶1ul
          dNTP 2ul
        10x buffer，2ul
总体系100ul
反应条件：95℃、5min，50℃、5min，72℃10min，
结果感觉合成的双链较少（电泳结果单练多，双链少），回收达不到要求。而且电洗脱感觉效果也不行
请大家支支招
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-21 00:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

你太善良

新虫 (著名写手)
怎么没有人啊
回复此楼
2楼2015-04-21 10:28:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
3楼2015-04-21 21:12:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sunshine092

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
直接送公司合成？
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-22 10:07:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我怎么觉得你引物反了呢？
正反两个引物应该是GGCTAGTCGTACGAT和AGCAGATGCAG
赞一下(1人) 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
5楼2015-04-22 10:34:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

森林独行者

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
对啊 ，一般设计引物都是上游和下游，没有下游怎么去延伸啊
赞一下 回复此楼
6楼2015-04-23 10:02:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goodluckwww

木虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如过你的序列方向均为5‘-3’的话，引物设计上有问题，Taq聚合酶合成方向为5‘到3’端。
假设不换模板链，单向扩增引物为5‘-AGCAGATGCAG-3’，预测熔点才40度，最好再往3’端延长一些。
赞一下 回复此楼
7楼2015-04-23 11:05:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的引物设计反了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2015-04-23 11:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Nabarro

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-04-22 10:34:35
我怎么觉得你引物反了呢？
正反两个引物应该是GGCTAGTCGTACGAT和AGCAGATGCAG

您好，我想问一下DNA文库的接头是怎么设计的，如果可以的话能否加一下您的联系方式
赞一下 回复此楼
9楼2015-11-13 21:42:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 你太善良 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 08:59 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:21 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +9 且听虎啸 2026-08-07 12/600 2026-08-07 21:53 by 理想三旬2025
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭