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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 请问如何鉴别DNA是双链还是单链？
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芳飞二月

银虫 (小有名气)

[求助] 请问如何鉴别DNA是双链还是单链？ 已有2人参与

如题 有一个DNA样品 想要知道是单链的还是双链要怎么办？  我是将人工合成的两条互补单链退火合成接头 现在想知道接头是否合成成功 ，刚做实验不久 求指教！
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1楼 2014-03-19 19:04:15
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

biostar2009

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 芳飞二月 at 2014-03-20 10:33:08
嗯 再问一下 你说的高浓度琼脂糖 浓度大概是多少？...

agarose最多配个3%，你根据你的ssDNA长度来吧
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10楼2014-03-20 12:47:09
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普通回帖

lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.跑琼脂糖胶，用EB染色，EB可以插入双链DNA中，进而染色，单链DAN则染不上。
2.圆二色，看有没有双链DNA的特征吸收峰。
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2楼2014-03-19 19:38:56
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芳飞二月

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-19 19:38:56
1.跑琼脂糖胶，用EB染色，EB可以插入双链DNA中，进而染色，单链DAN则染不上。
2.圆二色，看有没有双链DNA的特征吸收峰。

EB可以跑RNA 单链也是能显色的呀  
圆二色是什么？不懂，请解释一下，谢谢了
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-19 19:57:16
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-19 23:59:46
芳飞二月: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-03-21 14:16:50
EB确实可以让单链染色，包括primer
ssDNA oligo和dsDNA oligo，在比较高浓度的agaorose gel上可以区分，你需要上control，即比较没有做annealing的oligo和你annealing之后的产物，看看在大小上有没有区分，这个检测室可行的。
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4楼2014-03-19 20:20:56
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芳飞二月

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-19 20:20:56
EB确实可以让单链染色，包括primer
ssDNA oligo和dsDNA oligo，在比较高浓度的agaorose gel上可以区分，你需要上control，即比较没有做annealing的oligo和你annealing之后的产物，看看在大小上有没有区分，这个检测 ...

谢谢，请问 你说的看大小上的区别是指什么？
赞一下 回复此楼
5楼2014-03-19 20:50:32
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 芳飞二月 at 2014-03-19 20:50:32
谢谢，请问 你说的看大小上的区别是指什么？...

。。。dsDNA要比没有annealing上的ssDNA慢一点，前体是两个ssDNA差不多长。
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6楼2014-03-19 21:08:36
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 芳飞二月 at 2014-03-19 19:57:16
EB可以跑RNA 单链也是能显色的呀  
圆二色是什么？不懂，请解释一下，谢谢了...

就是CD，可以鉴定二级结构。
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7楼2014-03-19 23:16:55
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芳飞二月

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-19 21:08:36
。。。dsDNA要比没有annealing上的ssDNA慢一点，前体是两个ssDNA差不多长。...

嗯 再问一下 你说的高浓度琼脂糖 浓度大概是多少？
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8楼2014-03-20 10:33:08
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芳飞二月

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-19 23:16:55
就是CD，可以鉴定二级结构。...

我们科室做不了这个
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9楼2014-03-20 10:35:22
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