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芳飞二月

银虫 (小有名气)

[求助] 请问如何鉴别DNA是双链还是单链? 已有2人参与

如题 有一个DNA样品 想要知道是单链的还是双链要怎么办?  我是将人工合成的两条互补单链退火合成接头 现在想知道接头是否合成成功 ,刚做实验不久 求指教!
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 芳飞二月 at 2014-03-20 10:33:08
嗯 再问一下 你说的高浓度琼脂糖 浓度大概是多少?...

agarose最多配个3%,你根据你的ssDNA长度来吧
10楼2014-03-20 12:47:09
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.跑琼脂糖胶,用EB染色,EB可以插入双链DNA中,进而染色,单链DAN则染不上。
2.圆二色,看有没有双链DNA的特征吸收峰。
2楼2014-03-19 19:38:56
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芳飞二月

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-19 19:38:56
1.跑琼脂糖胶,用EB染色,EB可以插入双链DNA中,进而染色,单链DAN则染不上。
2.圆二色,看有没有双链DNA的特征吸收峰。

EB可以跑RNA 单链也是能显色的呀  
圆二色是什么?不懂,请解释一下,谢谢了
3楼2014-03-19 19:57:16
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-19 23:59:46
芳飞二月: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-03-21 14:16:50
EB确实可以让单链染色,包括primer
ssDNA oligo和dsDNA oligo,在比较高浓度的agaorose gel上可以区分,你需要上control,即比较没有做annealing的oligo和你annealing之后的产物,看看在大小上有没有区分,这个检测室可行的。
4楼2014-03-19 20:20:56
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芳飞二月

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-19 20:20:56
EB确实可以让单链染色,包括primer
ssDNA oligo和dsDNA oligo,在比较高浓度的agaorose gel上可以区分,你需要上control,即比较没有做annealing的oligo和你annealing之后的产物,看看在大小上有没有区分,这个检测 ...

谢谢,请问 你说的看大小上的区别是指什么?
5楼2014-03-19 20:50:32
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

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5楼: Originally posted by 芳飞二月 at 2014-03-19 20:50:32
谢谢,请问 你说的看大小上的区别是指什么?...

。。。dsDNA要比没有annealing上的ssDNA慢一点,前体是两个ssDNA差不多长。
6楼2014-03-19 21:08:36
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 芳飞二月 at 2014-03-19 19:57:16
EB可以跑RNA 单链也是能显色的呀  
圆二色是什么?不懂,请解释一下,谢谢了...

就是CD,可以鉴定二级结构。
7楼2014-03-19 23:16:55
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芳飞二月

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-19 21:08:36
。。。dsDNA要比没有annealing上的ssDNA慢一点,前体是两个ssDNA差不多长。...

嗯 再问一下 你说的高浓度琼脂糖 浓度大概是多少?
8楼2014-03-20 10:33:08
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芳飞二月

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-19 23:16:55
就是CD,可以鉴定二级结构。...

我们科室做不了这个
9楼2014-03-20 10:35:22
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