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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 跪求，，单链退火形成双链的步骤
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caaslc

金虫 (小有名气)

[求助] 跪求，，单链退火形成双链的步骤

我有两条长度为106bp的互补单链DNA序列，请教各位大虾，怎样将其退火形成双链DNA呀，求具体步骤。
Tm=78.08             78.47
%GC=50               50.94
需要把这两条链配制成多大浓度呀？越详细越好啊！拜谢了！
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对科研的评价，我用两个字概括：呵呵
1楼 2013-11-06 11:37:41
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
caaslc: 金币+2, ★有帮助 2013-11-07 16:55:17
以下两种都是成功的做法
第一种做法：取两单链互补DNA各1ul(100uM),加入48ddH2O，于EP管中，然后于沸水中煮5min，然后EP管连同沸水一起慢慢冷却至室温

第二种做法：溶于任一种buffer中，变性冷却，buffer可以为酶切buffer，PCRbuffer
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2楼2013-11-06 13:01:59
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liangdouxion

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
caaslc: 金币+1, ★有帮助 2013-11-07 16:55:29
http://www.beyotime.com/annealing-buf-dna.htm
请看这个 希望对你有用 我们实验室就是这么做的。
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毛球
6楼2013-11-06 16:29:57
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普通回帖

caaslc

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-06 13:01:59
以下两种都是成功的做法
第一种做法：取两单链互补DNA各1ul(100uM),加入48ddH2O，于EP管中，然后于沸水中煮5min，然后EP管连同沸水一起慢慢冷却至室温

第二种做法：溶于任一种buffer中，变性冷却，buffer可以为 ...

你好，请问第一种方法不需要buffer吗，直接加入48ul 水，最后浓度会不会太低呀
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对科研的评价，我用两个字概括：呵呵
3楼2013-11-06 15:10:02
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gyesang

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引用回帖:
3楼: Originally posted by caaslc at 2013-11-06 15:10:02
你好，请问第一种方法不需要buffer吗，直接加入48ul 水，最后浓度会不会太低呀...

对了，
我退火后双链是做连接的，不知道你的目的是什么？
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4楼2013-11-06 15:35:42
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caaslc

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-06 15:35:42
对了，
我退火后双链是做连接的，不知道你的目的是什么？...

我也是做链接，退火后两端会各有一个粘性末端，连到质粒上。
我还想请教一下，我的两条链是合成的，报告单上标注的是：此DNA5端、3端均为羟基。我在做连接之前是不是要加磷酸基团之类的工作，小弟刚接触这方面实验，还望大侠不吝赐教！
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5楼2013-11-06 16:28:45
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gyesang

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【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by caaslc at 2013-11-06 16:28:45
我也是做链接，退火后两端会各有一个粘性末端，连到质粒上。
我还想请教一下，我的两条链是合成的，报告单上标注的是：此DNA5端、3端均为羟基。我在做连接之前是不是要加磷酸基团之类的工作，小弟刚接触这方面实验 ...

退火双链不需要加磷酸基团，直接连
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7楼2013-11-06 16:45:57
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caaslc

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liangdouxion at 2013-11-06 16:29:57
http://www.beyotime.com/annealing-buf-dna.htm
请看这个 希望对你有用 我们实验室就是这么做的。

很有帮助啊，thank  you！
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对科研的评价，我用两个字概括：呵呵
8楼2013-11-06 17:45:10
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caaslc

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-06 16:45:57
退火双链不需要加磷酸基团，直接连...

我还想确认下，各1微升会不会浓度太低呀。我看好多都要10微升。谢谢啦！
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对科研的评价，我用两个字概括：呵呵
9楼2013-11-06 17:48:18
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gyesang

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引用回帖:
9楼: Originally posted by caaslc at 2013-11-06 17:48:18
我还想确认下，各1微升会不会浓度太低呀。我看好多都要10微升。谢谢啦！...

我说的浓度是100uM 的DNA加1ul
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10楼2013-11-06 19:41:10
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