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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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你太善良

新虫 (著名写手)

[交流] 小片段DNA双链 PCR合成 已有7人参与

各位大神大家好，我最近在构建一个含有随机片段的DNA文库，
设计了一个GGCTAGTCGTACGATNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNCTGCATCTGCT的模板连，
和一小段引物CCGATCAGCATGCT，使用PCR扩增形成双链，我的条件是这样的
体系：模板5ug
          引物15ug
           taq酶1ul
          dNTP 2ul
        10x buffer，2ul
总体系100ul
反应条件：95℃、5min，50℃、5min，72℃10min，
结果感觉合成的双链较少（电泳结果单练多，双链少），回收达不到要求。而且电洗脱感觉效果也不行
请大家支支招
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1楼 2015-04-21 00:28:31
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你太善良

新虫 (著名写手)
怎么没有人啊
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2楼2015-04-21 10:28:16
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nemo88

禁虫 (小有名气)
★
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本帖内容被屏蔽
3楼2015-04-21 21:12:25
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Sunshine092

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
直接送公司合成？
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4楼2015-04-22 10:07:03
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★
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我怎么觉得你引物反了呢？
正反两个引物应该是GGCTAGTCGTACGAT和AGCAGATGCAG
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
5楼2015-04-22 10:34:35
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森林独行者

新虫 (初入文坛)
★
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对啊 ，一般设计引物都是上游和下游，没有下游怎么去延伸啊
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6楼2015-04-23 10:02:42
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goodluckwww

木虫 (初入文坛)
★
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如过你的序列方向均为5‘-3’的话，引物设计上有问题，Taq聚合酶合成方向为5‘到3’端。
假设不换模板链，单向扩增引物为5‘-AGCAGATGCAG-3’，预测熔点才40度，最好再往3’端延长一些。
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7楼2015-04-23 11:05:03
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★
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你的引物设计反了

[ 发自小木虫客户端 ]
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8楼2015-04-23 11:09:54
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Nabarro

新虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-04-22 10:34:35
我怎么觉得你引物反了呢？
正反两个引物应该是GGCTAGTCGTACGAT和AGCAGATGCAG

您好，我想问一下DNA文库的接头是怎么设计的，如果可以的话能否加一下您的联系方式
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9楼2015-11-13 21:42:27
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