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你太善良

新虫 (著名写手)

[交流] 小片段DNA双链 PCR合成 已有7人参与

各位大神大家好,我最近在构建一个含有随机片段的DNA文库,
设计了一个GGCTAGTCGTACGATNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNCTGCATCTGCT的模板连,
和一小段引物CCGATCAGCATGCT,使用PCR扩增形成双链,我的条件是这样的
体系:模板5ug
          引物15ug
           taq酶1ul
          dNTP 2ul
        10x buffer,2ul
总体系100ul
反应条件:95℃、5min,50℃、5min,72℃10min,
结果感觉合成的双链较少(电泳结果单练多,双链少),回收达不到要求。而且电洗脱感觉效果也不行
请大家支支招
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nemo88

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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3楼2015-04-21 21:12:25
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Sunshine092

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
直接送公司合成?
4楼2015-04-22 10:07:03
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我怎么觉得你引物反了呢?
正反两个引物应该是GGCTAGTCGTACGAT和AGCAGATGCAG
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
5楼2015-04-22 10:34:35
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森林独行者

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
对啊 ,一般设计引物都是上游和下游,没有下游怎么去延伸啊
6楼2015-04-23 10:02:42
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