应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » RP-HPLC出峰问题
281/3返回列表123下一页
查看: 1874  |  回复: 27
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hqj200808

铜虫 (小有名气)

[求助] RP-HPLC出峰问题 已有4人参与

请教各位虫虫，
    跑标品的时候，竟然没有峰出来会是什么原因呀，隐黄素（一种脂溶性、弱极性的色素），C18柱，PDA检测器，用的流动相：乙腈：水=9：1，会不会是流动相的问题？还是其他的问题呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-10 16:45:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

supercat0821

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hqj200808 at 2015-04-10 20:47:49
用紫外分光光度计200-800nm扫描，有两个吸收峰 其中一个在453nm吸光度1.6几和目标物差不多，还有一个245 而且吸光度9.999，且基线不是很平稳。PS：标品用丙酮溶解，吸取200μl用乙腈定溶至10ml，20μl的上样量。不 ...

丙酮是第一步溶解的时候用了，后来用了乙腈稀释的，不会影响很大。波长你用245吧，400多都超了UV范围了。基线不平稳的因素有很多，可能与仪器是否平衡好也有关。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-04-11 22:12:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpuclz

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hqj200808 at 2015-04-11 22:56:55
是呀，隐黄素极性很小，应该是很容易洗脱出来的，目前只能用18柱的。在反相柱里面90%乙腈应该是极性应该较大了，反相柱中90%乙腈极性大于50%极性，不知这样理解是否正确？另外，看到有流动相A乙腈：水 9：1,B乙酸乙 ...

1、反相色谱，极性越小越难洗脱。
2、但就极性而言，水>乙腈。90%乙腈极性小于50%极性，90%乙腈的洗脱力大于50%。
3、反相色谱中不建议加入EA。
4、可以考虑，在流动相中加入一定比例的四氢呋喃或者异丙醇，增加洗脱力。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

hqj200808
8楼2015-04-12 09:16:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
丙酮在400附近已经没有吸收了，不会影响出峰。
你需要检查一下DAD光源的设置。通常测200～300nm吸收时用于长波的钨丝灯是不开的，而你测420左右吸收时钨丝灯是必需的。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

hqj200808
12楼2015-04-12 13:22:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

supercat0821

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hqj200808: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-04-11 22:58:54
90%乙腈？pda可以看全波长范围内的吸收，你挪动波长看看有没有峰。也可以用紫外看看有没有吸收和最大吸收波长。
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-10 17:26:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqj200808

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by supercat0821 at 2015-04-10 17:26:59
90%乙腈？pda可以看全波长范围内的吸收，你挪动波长看看有没有峰。也可以用紫外看看有没有吸收和最大吸收波长。

用紫外分光光度计200-800nm扫描，有两个吸收峰 其中一个在453nm吸光度1.6几和目标物差不多，还有一个245 而且吸光度9.999，且基线不是很平稳。PS：标品用丙酮溶解，吸取200μl用乙腈定溶至10ml，20μl的上样量。不知分光光度计基线不平是否与溶解用的丙酮有关，开始以为HPLC上样量少就没管了，会影响HPLC么  谢谢
赞一下 回复此楼
3楼2015-04-10 20:47:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpuclz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hqj200808: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-04-11 22:57:31
隐黄素的极性很小啊！
还有一种可能，在柱子上保留太强，90%的乙腈洗脱力不够。
楼主有条件的话，可以考虑用C8柱试试。
赞一下 回复此楼
5楼2015-04-11 22:34:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqj200808

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by supercat0821 at 2015-04-11 22:12:21
丙酮是第一步溶解的时候用了，后来用了乙腈稀释的，不会影响很大。波长你用245吧，400多都超了UV范围了。基线不平稳的因素有很多，可能与仪器是否平衡好也有关。...

额，可我的目标物的最适波长是450nm，不清楚波长扫描还出了另外一个大峰是怎么回事

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
6楼2015-04-11 22:42:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqj200808

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cpuclz at 2015-04-11 22:34:15
隐黄素的极性很小啊！
还有一种可能，在柱子上保留太强，90%的乙腈洗脱力不够。
楼主有条件的话，可以考虑用C8柱试试。

是呀，隐黄素极性很小，应该是很容易洗脱出来的，目前只能用18柱的。在反相柱里面90%乙腈应该是极性应该较大了，反相柱中90%乙腈极性大于50%极性，不知这样理解是否正确？另外，看到有流动相A乙腈：水 9：1,B乙酸乙酯，这样是不是又增大了流动相的极性？  谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
7楼2015-04-11 22:56:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

supercat0821

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hqj200808 at 2015-04-11 22:42:34
额，可我的目标物的最适波长是450nm，不清楚波长扫描还出了另外一个大峰是怎么回事
...

有次吸收峰的，正常。8楼的建议很好，你可以试试。反相，极性越大越容易随着流动相一起早出来。
赞一下 回复此楼
9楼2015-04-12 11:57:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
可以试试用100%的有机相。
赞一下 回复此楼
雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
10楼2015-04-12 12:37:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hqj200808 的主题更新
281/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂，262机械专硕 +8 嗯yyl 2026-04-08 8/400 2026-04-12 02:31 by 秋豆菜芽
[考研] 305求调剂 +6 77Qi 2026-04-07 6/300 2026-04-12 02:30 by 秋豆菜芽
[考研] 0860004 求调剂 309分 +9 Yin DY 2026-04-08 9/450 2026-04-11 22:55 by dongdian1
[考研] 调剂 +10 只叙离别辞 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:57 by 逆水乘风
[考研] 求调剂 +6 电气300求调剂不 2026-04-08 6/300 2026-04-11 20:14 by 逆水乘风
[考研] 085400 328分 求调剂 +10 喂你一个大橙子 2026-04-09 14/700 2026-04-11 19:53 by lqspecial
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
[考研] 一志愿中科大070300化学，314分求调剂 +12 wakeluofu 2026-04-09 12/600 2026-04-10 09:57 by liuhuiying09
[考研] 一志愿2110，化学学硕310分，本科重点双非求调剂 +18 努力奋斗112 2026-04-08 18/900 2026-04-09 23:28 by wolf97
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:01 by Orcid
[考研] 材料299专硕求调剂 +10 +21 2026-04-09 10/500 2026-04-09 17:34 by 1753564080
[考研] 材料307分求大佬组收留 +17 Hll胡 2026-04-07 17/850 2026-04-09 10:53 by liuhuiying09
[考研] 一志愿0807 数一英一 313 有没有二轮调剂 +11 emokidd 2026-04-08 12/600 2026-04-09 09:24 by wyf236
[考博] 材料方向考博，求推荐 +3 言语aaa 2026-04-05 4/200 2026-04-08 22:22 by nxgogo
[考研] 考研求调剂 +4 雯??? 2026-04-08 4/200 2026-04-08 21:44 by 土木硕士招生
[考研] 265求调剂 +19 小木虫085600 2026-04-06 21/1050 2026-04-08 10:38 by 逆水乘风
[考研] 344求调剂 +11 魏子per 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:01 by JourneyLucky
[考研] 316求调剂 +4 15318418673 2026-04-07 4/200 2026-04-07 22:12 by hemengdong
[考研] 071000生物学，一志愿深圳大学296分，求调剂 +12 TIckLw 2026-04-06 13/650 2026-04-07 20:34 by lijunpoly
[考研] 材料求调剂 +18 一样YWY 2026-04-05 18/900 2026-04-07 15:49 by dxlg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭