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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » RP-HPLC出峰问题
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hqj200808

铜虫 (小有名气)

[求助] RP-HPLC出峰问题 已有4人参与

请教各位虫虫，
    跑标品的时候，竟然没有峰出来会是什么原因呀，隐黄素（一种脂溶性、弱极性的色素），C18柱，PDA检测器，用的流动相：乙腈：水=9：1，会不会是流动相的问题？还是其他的问题呢？
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1楼 2015-04-10 16:45:12
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cpuclz

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hqj200808 at 2015-04-11 22:56:55
是呀，隐黄素极性很小，应该是很容易洗脱出来的，目前只能用18柱的。在反相柱里面90%乙腈应该是极性应该较大了，反相柱中90%乙腈极性大于50%极性，不知这样理解是否正确？另外，看到有流动相A乙腈：水 9：1,B乙酸乙 ...

1、反相色谱，极性越小越难洗脱。
2、但就极性而言，水>乙腈。90%乙腈极性小于50%极性，90%乙腈的洗脱力大于50%。
3、反相色谱中不建议加入EA。
4、可以考虑，在流动相中加入一定比例的四氢呋喃或者异丙醇，增加洗脱力。
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hqj200808
8楼2015-04-12 09:16:10
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supercat0821

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hqj200808: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-04-11 22:58:54
90%乙腈？pda可以看全波长范围内的吸收，你挪动波长看看有没有峰。也可以用紫外看看有没有吸收和最大吸收波长。
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2楼2015-04-10 17:26:59
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hqj200808

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by supercat0821 at 2015-04-10 17:26:59
90%乙腈？pda可以看全波长范围内的吸收，你挪动波长看看有没有峰。也可以用紫外看看有没有吸收和最大吸收波长。

用紫外分光光度计200-800nm扫描，有两个吸收峰 其中一个在453nm吸光度1.6几和目标物差不多，还有一个245 而且吸光度9.999，且基线不是很平稳。PS：标品用丙酮溶解，吸取200μl用乙腈定溶至10ml，20μl的上样量。不知分光光度计基线不平是否与溶解用的丙酮有关，开始以为HPLC上样量少就没管了，会影响HPLC么  谢谢
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3楼2015-04-10 20:47:49
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supercat0821

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hqj200808 at 2015-04-10 20:47:49
用紫外分光光度计200-800nm扫描，有两个吸收峰 其中一个在453nm吸光度1.6几和目标物差不多，还有一个245 而且吸光度9.999，且基线不是很平稳。PS：标品用丙酮溶解，吸取200μl用乙腈定溶至10ml，20μl的上样量。不 ...

丙酮是第一步溶解的时候用了，后来用了乙腈稀释的，不会影响很大。波长你用245吧，400多都超了UV范围了。基线不平稳的因素有很多，可能与仪器是否平衡好也有关。
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4楼2015-04-11 22:12:21
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