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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 关于有关物质HPLC定位不出峰的问题
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猪猪很呆

金虫 (小有名气)

[求助] 关于有关物质HPLC定位不出峰的问题已有4人参与

各位前辈，本人初入研发，做到有关物质定位时，出了些问题，我用的色谱条件是原料药标准中异构体的HPLC测定条件，然后拿了原料药合成后三步的中间体以与异构体测定法中要求制成供试品进样，结果原料药能出原料主峰和异构体的峰，但相同条件下中间体却没有出峰（1ml的流速走了近一个小时都没出峰，原料药与异构体是30min左右出的峰），流动相是乙腈：水（3：2），后来增大乙腈比例为（4：1），流速调到1.8ml，走了40min还是没出峰，想问一下前辈和高手们，问题出在哪，中间体的波长都做了扫描，中间体的最大吸收波长基本都在所用波长附近。柱子是C18柱，是不是柱子的原因，本身就无法分离中间体呢，我看了一下中间体的结构，中间体的结构中都比原料药多了一个TBS的基团（叔丁基二甲基硅烷），其他都差不多，会不会跟这个基团有关系呢，一般像这样的基团，有什么柱子能分析出来呢，谢谢各位前辈帮我支支招，谢谢啦！！
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1楼2014-07-16 17:21:47
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voyager88

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
猪猪很呆(zhychen2008代发): 金币+3, 多谢回帖交流 2014-07-19 18:23:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by 猪猪很呆 at 2014-07-17 09:41:26
谢谢你的回复啦，呵呵。溶剂是甲醇，溶解的还不错，稍微振荡一下就溶掉了，溶液很澄清。应该不会被滤掉吧；我走的是单个杂质，除了1分多钟出的溶剂峰意外，后面全是平的，不可能跟溶剂峰重叠吧。所以还蛮奇怪的。: ...

照你这么说所有原因都不是，那问题就没有办法解决了。解决问题的办法就是假设每一个存在的可能，然后按照可能存在的概率大小顺序一一去排除，知道找到答案。
色谱不出峰的可能就以下几种
1.紫外没有吸收，或者吸收很低而进样很少
2.物质为强保留物质，在走样时未被洗脱出来
3.溶样溶剂选择不对，对样品部分东西无法溶解
4.条件不好，与其它色谱峰发生重叠
5.样品发生分解，生色团断裂
6.进样瓶盖子盖太紧，在多次进样后形成负压，样品无法吸出
7.柱子为接通，流动相直接冲废液管道排出
8.进错样品
9.滤膜吸附很强，而过滤时没有弃掉初滤液
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7楼2014-07-17 09:57:58
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voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
猪猪很呆(News代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2014-07-16 21:11:23
有一种可能就是色谱峰重叠；还有一种可能就是你的溶剂无法溶解你的样品，在过滤时被滤掉了
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微信公众号：Pharmaguider（药事纵横），主页：www.pharmaguider.cn
2楼2014-07-16 17:31:30
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xiaomi6621

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
对映异构体？如果是的话，色谱条件就不对吧，柱子和流动相不适于检测对映异构体。
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5楼2014-07-17 09:48:31
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seaseeboy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
猪猪很呆(zhychen2008代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2014-07-19 18:23:00
1、加大浓度，有时候响应因子不用导致出峰峰面积小。
2、中间体是否在溶剂中会反应，因为溶剂也可以是反应剂或催化剂，换个溶剂试试？
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6楼2014-07-17 09:56:22
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猪猪很呆

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by voyager88 at 2014-07-16 17:31:30
有一种可能就是色谱峰重叠；还有一种可能就是你的溶剂无法溶解你的样品，在过滤时被滤掉了

谢谢你的回复啦，呵呵。溶剂是甲醇，溶解的还不错，稍微振荡一下就溶掉了，溶液很澄清。应该不会被滤掉吧；我走的是单个杂质，除了1分多钟出的溶剂峰意外，后面全是平的，不可能跟溶剂峰重叠吧。所以还蛮奇怪的。
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3楼2014-07-17 09:41:26
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roweahioh

新虫 (小有名气)
结构太相似，极性接近，就无法分得开了
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4楼2014-07-17 09:42:26
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猪猪很呆

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by seaseeboy at 2014-07-17 09:56:22
1、加大浓度，有时候响应因子不用导致出峰峰面积小。
2、中间体是否在溶剂中会反应，因为溶剂也可以是反应剂或催化剂，换个溶剂试试？

谢谢你的建议喔，呵呵
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8楼2014-07-17 10:53:20
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猪猪很呆

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by voyager88 at 2014-07-17 09:57:58
照你这么说所有原因都不是，那问题就没有办法解决了。解决问题的办法就是假设每一个存在的可能，然后按照可能存在的概率大小顺序一一去排除，知道找到答案。
色谱不出峰的可能就以下几种
1.紫外没有吸收，或者吸 ...

嗯，好的，谢谢你详细的建议，我去试试，排除一下，看到底问题出在哪。
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9楼2014-07-17 10:54:32
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猪猪很呆

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaomi6621 at 2014-07-17 09:48:31
对映异构体？如果是的话，色谱条件就不对吧，柱子和流动相不适于检测对映异构体。

谢谢你的回复。我做的是仿制药，原料药是日本药典标准，其中有一项就是测定异构体的测定法，柱子和流动相就是用的上面所述的。
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10楼2014-07-17 10:58:28
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