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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC保留时间的问题
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xiaomi6621

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] HPLC保留时间的问题 已有1人参与

用的是岛津的四元低压系统，用C泵（有机相）、D泵（缓冲盐）与用D泵（有机相）、C泵（缓冲盐），在完全相同的色谱条件下分析同一种物质，保留时间差别很大，这是为什么呢？流动相比例都是一样的，只是将泵换了个位置，再者用其他的两个泵，比如A/B、A/C、A/D、D/B、C/B（前面的泵是有机相后面的是缓冲盐）所走的保留时间都是差别不大的，就是C/D差别很大，而且与前几天用C/D的保留时间相比，现在明显推迟了10几分钟，这是什么原因呢？
  不知道大家看懂了没有，还希望多多指导一下，会是比例阀的问题吗？可是C/D与D/C咋就差那么多呢？
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1楼 2013-10-24 08:09:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

天马侠客

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
问题应该出在你调换泵时，泵里的缓冲盐有残留，当你再次使用时，有机相与缓冲盐比例就发生改变，所以，保留时间就变了。
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3楼2013-10-24 09:35:36
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gaojcon

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以用一路水，一路丙酮水溶液，在C/D 和 D/C上设置梯度运行一下，看一下梯度变换是否与设置的一致。
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8楼2013-10-24 12:15:36
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普通回帖

e_liang369

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
crity328: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来~ 2013-10-24 10:13:47
有可能是比例阀问题，可以试着排除一下，例如：purge A管时，把其他三管路全部提出流动相页面，看看是否其他三个管路的流动相也在流动。
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悲催的研发！
2楼2013-10-24 08:57:13
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wjg6670

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
检查各比例阀是否正常，关闭其他阀，分别走流动相，看是否正常。
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4楼2013-10-24 10:05:29
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xiaomi6621

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 天马侠客 at 2013-10-24 09:35:36
问题应该出在你调换泵时，泵里的缓冲盐有残留，当你再次使用时，有机相与缓冲盐比例就发生改变，所以，保留时间就变了。

应该不会影响这么大吧，而且系统都冲洗了好几遍，还是那样。。。。
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5楼2013-10-24 11:29:38
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xiaomi6621

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wjg6670 at 2013-10-24 10:05:29
检查各比例阀是否正常，关闭其他阀，分别走流动相，看是否正常。

关闭其他阀？是指关闭相应的泵吗？那是把流动相先混合再进样，也不对啊，这样比例阀就没起到作用了。。。。。
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6楼2013-10-24 11:32:06
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xiaomi6621

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by e_liang369 at 2013-10-24 08:57:13
有可能是比例阀问题，可以试着排除一下，例如：purge A管时，把其他三管路全部提出流动相页面，看看是否其他三个管路的流动相也在流动。

那都提出液面了，还会有流动相流动吗？纳闷的就是都是CD泵，只是交换了下流动相的位置，保留时间怎么会差么多。。。。
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7楼2013-10-24 11:35:26
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xiaomi6621

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gaojcon at 2013-10-24 12:15:36
你可以用一路水，一路丙酮水溶液，在C/D 和 D/C上设置梯度运行一下，看一下梯度变换是否与设置的一致。

你是说先是C水D丙酮水，再换成D水C丙酮水，那梯度是不变的吧，就是说水和丙酮水的比例是不变的吧，那如果不一致说明什么问题？
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9楼2013-10-24 12:27:19
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gaojcon

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by xiaomi6621 at 2013-10-24 12:27:19
你是说先是C水D丙酮水，再换成D水C丙酮水，那梯度是不变的吧，就是说水和丙酮水的比例是不变的吧，那如果不一致说明什么问题？...

如果不一致的话，就证明比例阀有问题吧，你可以找一下，液相的仪器验证的资料看一下哈。
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10楼2013-10-24 12:32:57
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