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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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青枫林

金虫 (正式写手)

[求助] HPLC 主峰保留时间 很不稳定

同一仪器,同一柱子,流动相:0.25%四甲基氢氧化铵(调ph5.5)-乙腈-甲醇(900:60:40)

新柱子,刚开始四五天内出峰时间12.5min左右,几天之后时间变到22min、26min,很不稳定!不知道是怎么回事?求解



流动相对保留时间有多大的影响,像我用的这个流动相,应该怎么配才算是合格的!
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liulangtj

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


青枫林(金币+2): 谢谢回帖 2011-07-20 13:14:31
qinhy(金币+1): 谢谢应助回帖~ 2011-07-20 17:51:52
可能:1.流动相放久了,导致比例不一致,或者几天内重复使用初始配制的流动相,2.流动相配制错误,3.看看柱子压力前后几天的是否变化了,是不是保护不当堵了,4.ph没有调节对;等等
2楼2011-07-20 12:49:04
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青枫林

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by liulangtj at 2011-07-20 12:49:04:
可能:1.流动相放久了,导致比例不一致,或者几天内重复使用初始配制的流动相,2.流动相配制错误,3.看看柱子压力前后几天的是否变化了,是不是保护不当堵了,4.ph没有调节对;等等

1. 流动相都是当天配当天用。2.配的比例很注意了,而且重复很多次,不会有大问题!3.ph值调节也没问题  4.柱子前后几天的压力是变化了,保留时间长的压力大,保留时间短的压力小!
我现在就觉得是流动相混合时出的问题,但是又觉得混合不会产生这么大的变化?
3楼2011-07-20 13:14:10
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dingjinglvde

木虫 (正式写手)


westzilch(金币+1): 谢谢交流! 2011-07-20 15:46:48
色谱柱填料的是用范围是怎么样的?
PH值范围、有机相和水相比例范围
有机相比例太小,容易长菌,所以应该当天使用,否则柱压会变高
4楼2011-07-20 13:50:31
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光辉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


青枫林(金币+2): 谢谢回帖 2011-07-20 15:05:10
jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-07-20 17:27:53
流动相是个很重要的因素,包括比例、pH、梯度都会影响出峰时间,
夏天的话还可能是温度的问题,室温高于设定温度的话柱温箱是没有效果的(如果没有制冷能力)。
还有就是lz最好仔细查查使用的柱子的性质,是不是允许pH5.5的情况。

如果是等度洗脱,现配好就可以,有5%甲醇应该可以排除长菌,当然即使这样通常也是当天配置,隔夜的话最好使用之前过个膜,两三天之前的最好就别用了。

不知道你期间用的样品是不是同一个,如果是的话也可能是时间太久样品发生了变化。
5楼2011-07-20 14:26:50
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shaodongfang

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

青枫林(金币+2): 谢谢回帖 2011-07-20 15:05:35
耐受性做了没,做下就知道你这个液相条件可行不可行了
6楼2011-07-20 14:46:13
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青枫林

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 光辉 at 2011-07-20 14:26:50:
流动相是个很重要的因素,包括比例、pH、梯度都会影响出峰时间,
夏天的话还可能是温度的问题,室温高于设定温度的话柱温箱是没有效果的(如果没有制冷能力)。
还有就是lz最好仔细查查使用的柱子的性质,是不是 ...

流动相、样品都是当天配的,pH也在柱子的使用范围内,比例、pH都严格控制了!
7楼2011-07-20 15:04:47
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青枫林

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by shaodongfang at 2011-07-20 14:46:13:
耐受性做了没,做下就知道你这个液相条件可行不可行了

耐受性还没做,就现在的分析看是流动相混合的原因!
8楼2011-07-20 15:06:12
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zhgjsyzhyang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

青枫林(金币+2): 谢谢! 2011-07-20 15:23:10
可能是没混匀,尤其是用到四甲基氢氧化铵之类的,超声时间长一点吧。
9楼2011-07-20 15:19:07
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Sky2N78

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-07-20 17:28:02
1.可能是流动相没混匀:流动相溶剂混合后,应先手动振摇,前后左右上下各个方向(就是盖上瓶盖使劲摇,但是要确保拿稳瓶子),然后超声再混合和脱气。
2.柱子堵塞:按我以前的经验,使用甲醇或甲醇水溶液正常流速清洗柱子30分钟以上。
10楼2011-07-20 16:59:15
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