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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC 主峰保留时间 很不稳定
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青枫林

金虫 (正式写手)

[求助] HPLC 主峰保留时间 很不稳定

同一仪器，同一柱子，流动相：0.25%四甲基氢氧化铵（调ph5.5）-乙腈-甲醇（900：60：40）

新柱子，刚开始四五天内出峰时间12.5min左右，几天之后时间变到22min、26min，很不稳定！不知道是怎么回事？求解



流动相对保留时间有多大的影响，像我用的这个流动相，应该怎么配才算是合格的！
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1楼 2011-07-20 11:58:23
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青枫林

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 光辉 at 2011-07-20 14:26:50:
流动相是个很重要的因素，包括比例、pH、梯度都会影响出峰时间，
夏天的话还可能是温度的问题，室温高于设定温度的话柱温箱是没有效果的（如果没有制冷能力）。
还有就是lz最好仔细查查使用的柱子的性质，是不是 ...

流动相、样品都是当天配的，pH也在柱子的使用范围内，比例、pH都严格控制了！
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7楼2011-07-20 15:04:47
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liulangtj

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
青枫林(金币+2): 谢谢回帖 2011-07-20 13:14:31
qinhy(金币+1): 谢谢应助回帖~ 2011-07-20 17:51:52
可能：1.流动相放久了，导致比例不一致，或者几天内重复使用初始配制的流动相，2.流动相配制错误，3.看看柱子压力前后几天的是否变化了，是不是保护不当堵了，4.ph没有调节对；等等
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2楼2011-07-20 12:49:04
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青枫林

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by liulangtj at 2011-07-20 12:49:04:
可能：1.流动相放久了，导致比例不一致，或者几天内重复使用初始配制的流动相，2.流动相配制错误，3.看看柱子压力前后几天的是否变化了，是不是保护不当堵了，4.ph没有调节对；等等

1. 流动相都是当天配当天用。2.配的比例很注意了，而且重复很多次，不会有大问题！3.ph值调节也没问题  4.柱子前后几天的压力是变化了，保留时间长的压力大，保留时间短的压力小！
我现在就觉得是流动相混合时出的问题，但是又觉得混合不会产生这么大的变化？
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3楼2011-07-20 13:14:10
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dingjinglvde

木虫 (正式写手)
★
westzilch(金币+1): 谢谢交流！ 2011-07-20 15:46:48
色谱柱填料的是用范围是怎么样的？
PH值范围、有机相和水相比例范围
有机相比例太小，容易长菌，所以应该当天使用，否则柱压会变高
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4楼2011-07-20 13:50:31
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