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hqj200808

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by cpuclz at 2015-04-12 09:16:10
1、反相色谱,极性越小越难洗脱。
2、但就极性而言,水>乙腈。90%乙腈极性小于50%极性,90%乙腈的洗脱力大于50%。
3、反相色谱中不建议加入EA。
4、可以考虑,在流动相中加入一定比例的四氢呋喃或者异丙醇, ...

恩,学习了,谢谢

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11楼2015-04-12 13:18:12
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
丙酮在400附近已经没有吸收了,不会影响出峰。
你需要检查一下DAD光源的设置。通常测200~300nm吸收时用于长波的钨丝灯是不开的,而你测420左右吸收时钨丝灯是必需的。

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12楼2015-04-12 13:22:30
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Tony_young

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by supercat0821 at 2015-04-11 22:12:21
丙酮是第一步溶解的时候用了,后来用了乙腈稀释的,不会影响很大。波长你用245吧,400多都超了UV范围了。基线不平稳的因素有很多,可能与仪器是否平衡好也有关。...

你懂不懂分析啊?紫外可见分光光度计的检测波长单位是185~1100nm,一般硅光电池是190~1100,光电倍增管是185~900。450正好在仪器最稳定的中间波长区!240是不能采用的,因为乙腈在200nm左右有末端吸收!!

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13楼2015-04-12 13:45:11
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hqj200808

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by superyeast at 2015-04-12 13:22:30
丙酮在400附近已经没有吸收了,不会影响出峰。
你需要检查一下DAD光源的设置。通常测200~300nm吸收时用于长波的钨丝灯是不开的,而你测420左右吸收时钨丝灯是必需的。

嗯,谢谢提醒,刚接触,还慢慢在学习。多谢大家的帮助
14楼2015-04-12 17:04:02
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hqj200808

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cpuclz at 2015-04-12 09:16:10
1、反相色谱,极性越小越难洗脱。
2、但就极性而言,水>乙腈。90%乙腈极性小于50%极性,90%乙腈的洗脱力大于50%。
3、反相色谱中不建议加入EA。
4、可以考虑,在流动相中加入一定比例的四氢呋喃或者异丙醇, ...

还想请教下,不建议流动相加乙酸乙酯 是因为流动相中有水么?可能会造成哪些后果呢,因为我看到分离类胡萝卜素有几篇报道用的是这个流动相,但也听说用EA不好,有点迷糊
15楼2015-04-12 17:17:20
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hqj200808

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by supercat0821 at 2015-04-12 11:57:54
有次吸收峰的,正常。8楼的建议很好,你可以试试。反相,极性越大越容易随着流动相一起早出来。...

嗯  谢谢
16楼2015-04-12 17:19:50
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cpuclz

木虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by hqj200808 at 2015-04-12 17:17:20
还想请教下,不建议流动相加乙酸乙酯 是因为流动相中有水么?可能会造成哪些后果呢,因为我看到分离类胡萝卜素有几篇报道用的是这个流动相,但也听说用EA不好,有点迷糊...

乙酸乙酯和水不能互溶,会损伤柱子。
反相柱在设计时,是用水、乙腈、甲醇做流动相的,用乙酸乙酯的话会损伤柱子。
尽量避免用乙酸乙酯或者二氯甲烷之类的,用四氢呋喃代替。
17楼2015-04-12 18:11:27
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hqj200808

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by cpuclz at 2015-04-12 18:11:27
乙酸乙酯和水不能互溶,会损伤柱子。
反相柱在设计时,是用水、乙腈、甲醇做流动相的,用乙酸乙酯的话会损伤柱子。
尽量避免用乙酸乙酯或者二氯甲烷之类的,用四氢呋喃代替。...

哦,那如果不加水呢?是说上次用的时候跑完标品,跑样品的时候就出现柱压过高
18楼2015-04-12 18:31:36
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cpuclz

木虫 (正式写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by hqj200808 at 2015-04-12 18:31:36
哦,那如果不加水呢?是说上次用的时候跑完标品,跑样品的时候就出现柱压过高...

我没做过不加水的反相。不过色谱柱的说明书上有说,别用乙酸乙酯之类的。
走样品柱压高,很可能是样品里杂质太多。建议在色谱柱前加一个预柱,或者进样前过一下SPE小柱。
19楼2015-04-12 18:50:25
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hqj200808

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by cpuclz at 2015-04-12 18:50:25
我没做过不加水的反相。不过色谱柱的说明书上有说,别用乙酸乙酯之类的。
走样品柱压高,很可能是样品里杂质太多。建议在色谱柱前加一个预柱,或者进样前过一下SPE小柱。...

嗯,谢谢!你懂的知识好多呀
20楼2015-04-12 19:00:19
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