8楼: Originally posted by cpuclz at 2015-04-12 09:16:10
1、反相色谱，极性越小越难洗脱。
2、但就极性而言，水>乙腈。90%乙腈极性小于50%极性，90%乙腈的洗脱力大于50%。
3、反相色谱中不建议加入EA。
4、可以考虑，在流动相中加入一定比例的四氢呋喃或者异丙醇， ...

4楼: Originally posted by supercat0821 at 2015-04-11 22:12:21
丙酮是第一步溶解的时候用了，后来用了乙腈稀释的，不会影响很大。波长你用245吧，400多都超了UV范围了。基线不平稳的因素有很多，可能与仪器是否平衡好也有关。...

12楼: Originally posted by superyeast at 2015-04-12 13:22:30
丙酮在400附近已经没有吸收了，不会影响出峰。
你需要检查一下DAD光源的设置。通常测200～300nm吸收时用于长波的钨丝灯是不开的，而你测420左右吸收时钨丝灯是必需的。

8楼: Originally posted by cpuclz at 2015-04-12 09:16:10
1、反相色谱，极性越小越难洗脱。
2、但就极性而言，水>乙腈。90%乙腈极性小于50%极性，90%乙腈的洗脱力大于50%。
3、反相色谱中不建议加入EA。
4、可以考虑，在流动相中加入一定比例的四氢呋喃或者异丙醇， ...

9楼: Originally posted by supercat0821 at 2015-04-12 11:57:54
有次吸收峰的，正常。8楼的建议很好，你可以试试。反相，极性越大越容易随着流动相一起早出来。...

15楼: Originally posted by hqj200808 at 2015-04-12 17:17:20
还想请教下，不建议流动相加乙酸乙酯 是因为流动相中有水么？可能会造成哪些后果呢，因为我看到分离类胡萝卜素有几篇报道用的是这个流动相，但也听说用EA不好，有点迷糊...

17楼: Originally posted by cpuclz at 2015-04-12 18:11:27
乙酸乙酯和水不能互溶，会损伤柱子。
反相柱在设计时，是用水、乙腈、甲醇做流动相的，用乙酸乙酯的话会损伤柱子。
尽量避免用乙酸乙酯或者二氯甲烷之类的，用四氢呋喃代替。...

18楼: Originally posted by hqj200808 at 2015-04-12 18:31:36
哦，那如果不加水呢？是说上次用的时候跑完标品，跑样品的时候就出现柱压过高...

19楼: Originally posted by cpuclz at 2015-04-12 18:50:25
我没做过不加水的反相。不过色谱柱的说明书上有说，别用乙酸乙酯之类的。
走样品柱压高，很可能是样品里杂质太多。建议在色谱柱前加一个预柱，或者进样前过一下SPE小柱。...