24小时热门版块排行榜    

查看: 1273  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

王忆楠yn

新虫 (小有名气)

[求助] pcr反应cytb序列扩不出原因?求分析! 已有2人参与

本人本科生,目前做书虱的种内鉴定。之前用引物扩增ITS序列,电泳出现条带,但是送去公司检测,说亮带里有比较乱,无法测序。现在用引物扩增cytb序列,发现没有条带。
    试剂
ddh2o                                   31.5ul
dNTP                                         4ul
buffer(Mg2+)                             5ul
引物1                                       1.5ul                              4个ep管分装     每个ep12.5ul
引物2                                       1.5ul
taq酶                                       0.5ul
模板                                        6ul
(之前老师也做过几次,同样没有条带)退火温度为40.0   41.2  43.9   47.7   52.6   56.5  58.8    60.0“℃。
模板有一年了,但是its 有条带,很亮,只是无法测序。用新的模板可以扩出很亮的条带(cytb)。想求助是不是模板的问题.  
cytb:
F    TATGTACTACCATGAGGACAAATAT
R    ATTACACCTCCTAATTATTAGGAAT
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王忆楠yn

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lomis at 2015-04-10 16:10:53
尽信书不如无书,你既然没有做出来就应该想想问题怎么解决。...

谨记
8楼2015-04-10 22:11:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

lomis

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-04-10 09:21:29
出现PCR有杂带确实无法测序,因为会有杂峰。模板不一定是主要问题,可能是你扩增出了非特异性条带,但是没有切胶纯化。
没有命运,只有选择!
2楼2015-04-10 09:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王忆楠yn

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lomis at 2015-04-10 09:04:46
出现PCR有杂带确实无法测序,因为会有杂峰。模板不一定是主要问题,可能是你扩增出了非特异性条带,但是没有切胶纯化。

谢谢!我试过新鲜的模板,cytb扩的条带特别好,而且测序也很成功 !但是旧的模板有时候会出现非常微弱的条带,大多没有条带。前几天做了个二次pcr发现出现条带,但是分子量好像小了一点。不知道是什么因素?

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-04-10 09:20:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lomis

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 王忆楠yn at 2015-04-10 09:20:23
谢谢!我试过新鲜的模板,cytb扩的条带特别好,而且测序也很成功 !但是旧的模板有时候会出现非常微弱的条带,大多没有条带。前几天做了个二次pcr发现出现条带,但是分子量好像小了一点。不知道是什么因素?
...

非特异性条带,PCR中经常会出现类似问题,可通过延长引物长度来解决。
没有命运,只有选择!
4楼2015-04-10 09:22:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 i3KBRD19ERkG 2026-09-16 3/150 2026-09-17 00:50 by Tql5LQhh5rLK
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-16 21:14 by MHf40yA0Uhyb
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 yaCh4X3wd045 2026-09-14 3/150 2026-09-16 20:39 by MHf40yA0Uhyb
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 9/450 2026-09-16 18:36 by rRvxEj3zorCy
[找工作] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-16 15:12 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-16 14:27 by i3KBRD19ERkG
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-16 06:27 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:15 by LH5NkK5Ud4bh
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 03:50 by DgNGHc3h5tPl
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-16 03:14 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:50 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 02:23 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:14 by DgNGHc3h5tPl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:26 by zNcEhTcH7ihq
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:59 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:59 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 14:58 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 09:38 by VMDqgnlKimtZ
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
请填处理意见