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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建质粒问题
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莉莉儿baby

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建质粒问题 已有1人参与

质粒构建最后一步总是不能长菌，不知道问题出在哪一步了，很惆怅，酶切之后用slice回收，是回收试剂盒有问题吗，因为其他实验步骤和实验室的同学都一样，只有回收用的试剂盒不一样
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1楼 2015-04-02 08:47:05
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
回收试剂盒的问题很好确定，回收完测过浓度吗？不知道你具体的实验设计，先检查酶切位点设计，还有抗生素有没有加对，如果片段是pcr再酶切的话有没有保护碱基，双酶切兼容性等等，需要更多信息

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2015-04-02 09:12:31
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莉莉儿baby

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxzk at 2015-04-02 09:12:31
回收试剂盒的问题很好确定，回收完测过浓度吗？不知道你具体的实验设计，先检查酶切位点设计，还有抗生素有没有加对，如果片段是pcr再酶切的话有没有保护碱基，双酶切兼容性等等，需要更多信息
...

回收完没有测浓度，用PCR产物连接到T载体上酶切，用的是ecorI H和bamh I 酶切
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3楼2015-04-02 10:40:15
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