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莉莉儿baby

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建质粒问题 已有1人参与

质粒构建最后一步总是不能长菌,不知道问题出在哪一步了,很惆怅,酶切之后用slice回收,是回收试剂盒有问题吗,因为其他实验步骤和实验室的同学都一样,只有回收用的试剂盒不一样
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
回收试剂盒的问题很好确定,回收完测过浓度吗?不知道你具体的实验设计,先检查酶切位点设计,还有抗生素有没有加对,如果片段是pcr再酶切的话有没有保护碱基,双酶切兼容性等等,需要更多信息

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2015-04-02 09:12:31
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莉莉儿baby

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxzk at 2015-04-02 09:12:31
回收试剂盒的问题很好确定,回收完测过浓度吗?不知道你具体的实验设计,先检查酶切位点设计,还有抗生素有没有加对,如果片段是pcr再酶切的话有没有保护碱基,双酶切兼容性等等,需要更多信息
...

回收完没有测浓度,用PCR产物连接到T载体上酶切,用的是ecorI H和bamh I 酶切
3楼2015-04-02 10:40:15
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