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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠

[求助] 提取mRNA遇到的问题 已有1人参与

我用全式金的盒子,提取mRNA,把组织磨碎之后,加蛋白酶K,56度作用15分钟之后,离心组织,在上清的最上层,漂浮着一层白色的絮状物,不知道,是什么,有高手解答一下吗?以上都是按照说明书操作。我拿提取的mRNA跑琼脂糖凝胶电泳,出现单一条带,很亮,没有出现三条带。是什么原因?
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yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飞走的希望: 金币+2 2015-04-03 07:26:38
一般mRNA只占总RNA的5%左右,你提取的应该是总RNA,琼脂糖电泳只出现一条带,应该是28S最亮的一条。看你实验下一步是要做什么了,可以先往下继续实验,根据结果再判断。
2楼2015-04-01 10:11:45
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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠

引用回帖:
2楼: Originally posted by yesucao at 2015-04-01 10:11:45
一般mRNA只占总RNA的5%左右,你提取的应该是总RNA,琼脂糖电泳只出现一条带,应该是28S最亮的一条。看你实验下一步是要做什么了,可以先往下继续实验,根据结果再判断。

我反转录之后可以P出单一条带,我就是在纠结只别人都是三条带,我却只弄出一条带,我也可以正常做。
3楼2015-04-02 03:28:56
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yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
飞走的希望: 金币+2 2015-04-03 07:27:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞走的希望 at 2015-04-02 03:28:56
我反转录之后可以P出单一条带,我就是在纠结只别人都是三条带,我却只弄出一条带,我也可以正常做。...

既然下一步实验是没有问题的,那你提取RNA的就没有问题。呃,只有一条带,可能的原因:电泳的时候上样量多了,28S和18S条带很近,所以没有分开,5S一般条带很淡,看不出来。
4楼2015-04-02 13:03:57
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