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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提取mRNA遇到的问题
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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠

[求助] 提取mRNA遇到的问题 已有1人参与

我用全式金的盒子,提取mRNA，把组织磨碎之后，加蛋白酶K，56度作用15分钟之后，离心组织，在上清的最上层，漂浮着一层白色的絮状物，不知道，是什么，有高手解答一下吗？以上都是按照说明书操作。我拿提取的mRNA跑琼脂糖凝胶电泳，出现单一条带，很亮，没有出现三条带。是什么原因？
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1楼 2015-04-01 06:08:21
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yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
飞走的希望: 金币+2 2015-04-03 07:26:38
一般mRNA只占总RNA的5%左右，你提取的应该是总RNA，琼脂糖电泳只出现一条带，应该是28S最亮的一条。看你实验下一步是要做什么了，可以先往下继续实验，根据结果再判断。
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2楼2015-04-01 10:11:45
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飞走的希望

木虫 (著名写手)

笑的太痴颠
引用回帖:
2楼: Originally posted by yesucao at 2015-04-01 10:11:45
一般mRNA只占总RNA的5%左右，你提取的应该是总RNA，琼脂糖电泳只出现一条带，应该是28S最亮的一条。看你实验下一步是要做什么了，可以先往下继续实验，根据结果再判断。

我反转录之后可以P出单一条带，我就是在纠结只别人都是三条带，我却只弄出一条带，我也可以正常做。
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3楼2015-04-02 03:28:56
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yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
飞走的希望: 金币+2 2015-04-03 07:27:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞走的希望 at 2015-04-02 03:28:56
我反转录之后可以P出单一条带，我就是在纠结只别人都是三条带，我却只弄出一条带，我也可以正常做。...

既然下一步实验是没有问题的，那你提取RNA的就没有问题。呃，只有一条带，可能的原因：电泳的时候上样量多了，28S和18S条带很近，所以没有分开，5S一般条带很淡，看不出来。
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4楼2015-04-02 13:03:57
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