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zuoyue911

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1楼 2012-12-27 13:37:37
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gyesang

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优秀版主优秀版主
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我觉得用内参来进行相对定量，没有问题啊，都是目的基因相对于内参基因的倍数变化，相对定量并不是说，两个比较的东西，内参表达水平就是一样的啊
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2楼2012-12-27 21:27:32
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ccharlien

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我觉得可以做绝对定量，取一样数量的细胞提RNA，然后比如取出相当于1000个细胞的RNA做模板，逆转录，定量PCR（可以用一步法），知道每个菌种的RNA拷贝数高低，通过重复试验来保证结果准确，然后做统计确定两者的差异有没有统计学意义。
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3楼2012-12-27 23:03:46
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zuoyue911

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4楼2012-12-27 23:14:43
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zuoyue911

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5楼2012-12-27 23:21:24
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ccharlien

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by zuoyue911 at 2012-12-27 23:21:24
谢谢ccharlien的建议。
你的意思是不是不断重复实验，只要样本量够大，能通过统计学分析来判断差异，从而消除模板不同带来的误差。
是不是用目标基因PCR回收产物的不同稀释度做标准曲线，细胞浓度做梯度提取RNA反 ...

这种试验一般做三次独立的就行了，不用不断重复啊。
没试过用PCR回收产物做标准品，一般用质粒。
我觉得提RNA时候细胞的量太少误差会更大，还是以一定多的量提了再稀释比较好吧。
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6楼2012-12-28 00:11:59
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