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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 【求助】关于DNS测定还原糖，进行测吸光值的问题，请教高人指教，非诚勿扰！
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SYP881130

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】关于DNS测定还原糖，进行测吸光值的问题，请教高人指教，非诚勿扰！

本人在做DNS测还原糖的实验时，由于实验过程中遇到所测样品本身就有颜色，这到底对后期中测定吸光值是否有影响？？？
当然很多人第一反应都认为会有，但有个师姐给了个说法——DNS与还原糖作用，它的生色基团是在测定所设定的波长处有特征吸收的，如果空白样（DNS+有色样品）在所设波长无吸收应该就无影响！————有点赞同！
自己也在想方法尝试消除干扰！
个人对这个分光光度计在深层次的原理不是很了解（主要是类似上述有色基团吸光作用原理），还有我上述的因素若有影响如何设计实验步骤进行消除，希望高手给个权威的指教，非诚勿扰！
还有本人周一至周五实习，周五或周末晚都会上网，61774166，望君者赐教！！！谢谢！
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不敢从心所欲！！！
1楼 2009-09-19 22:42:49
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liujunhero

新虫 (文学泰斗)

文献杰出贡献文献杰出贡献
★ ★ ★ ★ ★
SYP881130(金币+2):谢谢参与
SYP881130(金币+4,VIP+0):其实今天做了，数据说明对实验影响可以忽略，准确点说要看待测样品的具体颜色，有些确实有影响，而我的淡黄色和淡棕色的没什么影响，在520下的吸收差值与仪器波动造成的差值相当，可以忽略！其实我个人认为还是要看待测液具体的生色基团！而且波长范围从440-560都会有响应（是吸收曲线的中间部分），520-550是比较可信的！ 9-20 14:54
样品自身的颜色肯定是有影响的啊
你师姐只说对了一半，一般样品在480nm处都是有吸收的呢
最好的办法就是扣除样品的吸光度值
用蒸馏水替代DNS试剂，比如原来是1ml样品+2mlDNS，现在换成1ml样品+2ml蒸馏水
这样测量得到吸光度值为A1
而1ml样品+2mlDNS的吸光度值为A2
A2-A1即为你样品的真实的还原糖含量的吸光度值
相信我没错的
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2楼2009-09-20 13:58:45
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SYP881130

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liujunhero at 2009-9-20 13:58:
样品自身的颜色肯定是有影响的啊
你师姐只说对了一半，一般样品在480nm处都是有吸收的呢
最好的办法就是扣除样品的吸光度值
用蒸馏水替代DNS试剂，比如原来是1ml样品+2mlDNS，现在换成1ml样品+2ml蒸馏水
这样 ...

恩，好的，我试试!
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不敢从心所欲！！！
3楼2009-09-20 14:33:28
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SYP881130

银虫 (小有名气)
今天做了，数据说明对实验影响可以忽略，准确点说要看待测样品的具体颜色，有些确实有影响，而我的淡黄色和淡棕色的没什么影响，在520下的吸收差值与仪器波动造成的差值相当，可以忽略！其实我个人认为还是要看待测液具体的生色基团！而且波长范围从440-560都会有响应（是吸收曲线的中间部分），520-550是比较可信的！
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不敢从心所欲！！！
4楼2009-09-20 14:55:06
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liujunhero

新虫 (文学泰斗)

文献杰出贡献文献杰出贡献
★
opq691(金币+1,VIP+0):感谢参与交流，欢迎常来分析版 11-2 22:24
引用回帖:
Originally posted by SYP881130 at 2009-9-20 14:55:
今天做了，数据说明对实验影响可以忽略，准确点说要看待测样品的具体颜色，有些确实有影响，而我的淡黄色和淡棕色的没什么影响，在520下的吸收差值与仪器波动造成的差值相当，可以忽略！其实我个人认为还是要看待 ...

只要看DNS测定波长上是否有样品吸收即可，有的话就扣除掉
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5楼2009-09-21 12:31:26
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corrs

金虫 (正式写手)
★
SYP881130(金币+2):谢谢参与
DNS配制方法有好几种，请问有什么区别啊？能把配制方法和测定时的波长告诉我吗？先谢啦~
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6楼2009-10-30 20:01:00
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SYP881130

银虫 (小有名气)
★ ★
opq691(金币+2,VIP+0):感谢参与交流，欢迎常来分析版 11-2 22:24
引用回帖:
Originally posted by corrs at 2009-10-30 20:01:
DNS配制方法有好几种，请问有什么区别啊？能把配制方法和测定时的波长告诉我吗？先谢啦~

是的，配制方法确实很多，我使用的是DNS7.5G氢氧化钠14.0G，于1000ML水（预先煮沸10分钟，除氧）。然后加酒石酸钠216，苯酚（50度水浴融化）6。5ML，偏重亚硫酸钠6.0！就这么多，放1-5天后使用，保质期一个月。平时不用放冰箱！480-560皆可，写出来就交代一下波长就行，常用520或560！
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不敢从心所欲！！！
7楼2009-10-31 15:22:04
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qq啊沁

金虫 (正式写手)
★
SYP881130(金币+2):谢谢参与
有谁研究过还原糖分子量的问题？
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8楼2010-09-02 15:37:49
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tangz_1

新虫 (初入文坛)
★
SYP881130(金币+2): 谢谢参与
引用回帖:
15399615楼: Originally posted by SYP881130 at 2009-09-19 22:42:49:
本人在做DNS测还原糖的实验时，由于实验过程中遇到所测样品本身就有颜色，这到底对后期中测定吸光值是否有影响？？？
当然很多人第一反应都认为会有，但有个师姐给了个说法——DNS与还原糖作用，它的生色基团是在 ...

空白不加DNS，OD值偏大，
空白应加DNS煮沸显色后，在补加待测液，背景色太浓，则测标准曲线和测样时，都安排显色后定容到10mL或15mL或20mL（根据比色管定容刻度而言）
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9楼2012-05-12 12:37:45
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夏小暖

银虫 (小有名气)
★
SYP881130(金币+2): 谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by liujunhero at 2009-09-20 13:58:45
样品自身的颜色肯定是有影响的啊
你师姐只说对了一半，一般样品在480nm处都是有吸收的呢
最好的办法就是扣除样品的吸光度值
用蒸馏水替代DNS试剂，比如原来是1ml样品+2mlDNS，现在换成1ml样品+2ml蒸馏水
这样测 ...

吸光值A1和A2的差别在于加入的是DNS和水，两者的差值难道不是DNS的的吸光值么？小女学识浅薄，无知之处还请指教！
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虽然是新手，但求进步，但求超越。
10楼2013-07-17 18:14:53
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