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dingruicnooc

铁虫 (小有名气)

[求助] 请教高人一个荧光和散射的问题

比方说有一个荧光分子,激发波长500nm发射波长550nm,将其标记在一个载体上之后,
这个载体在此激发波长处的散射强度太大了,把荧光的峰都遮盖住了,想问问各位高人
有没有什么办法能避免这个问题呢?我试了在比较短的波长处激发,比方说450nm,散
射峰还是很强以至于荧光的发射峰基本都看不见了。
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gzzhiyoux

金虫 (小有名气)

金虫

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助,欢迎常来分析版交流 ^ ^ 2012-09-14 17:09:28
投机点的办法就是看你散射峰覆盖哪一段,换另外一种最大发射波长比这长或短的荧光分子标记,呵呵!
自强不息
2楼2012-09-14 15:21:35
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gzzhiyoux

金虫 (小有名气)

金虫

【答案】应助回帖

另外看你那个散射是拉曼散射峰,还是普通反射峰,普通反射一般波长跟入射光波长相等,你可以试试其他大于或小于500nm的入射光激发,荧光发射峰位置不会受影响,可能强弱会跟最大激发(500nm)有点差异,扣空白就没影响了!
自强不息
3楼2012-09-14 15:25:58
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dingruicnooc

铁虫 (小有名气)

空白扣除也没用啊,散射峰太宽太强,把荧光信号都覆盖住了。
4楼2012-09-15 10:21:37
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杨晓慧0307

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
soundhorizo: 金币+2 2012-09-15 18:35:47
我现在做的实验,散射光拖尾峰对荧光峰的影响,是我遇到的最大的问题,一直没有很好的解决。我试过用滤光片,但是对我的荧光峰也有减弱作用。试过减小激发波长,但是要么还是散射光太强,要么就是我的荧光峰也跟着减弱以至于看不到。你的载体是固体么?如果是固体,原因就是激发光不能透射过去,只能反射到检测器里面,以至于激发光(就是散射光)的峰太强,会掩盖掉荧光峰。由于解决不了这个问题,我就换了检测对象,努力在寻找激发波长和发射波长相隔比较远的样品,企图让激发光的峰不太容易影响我的荧光峰。所以类推的话,你可不可以换一个激发波长和发射波长离得比较远的载体?
好好学习!
5楼2012-09-15 16:28:52
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rockyss

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
soundhorizo: 金币+1, 欢迎常来分析版 ^^ 2012-09-15 18:36:07
可以分别扫一下载体和标记分子的吸收谱,看能不能选一个最优波长进行激发,如果不行,就要考虑换标记分子,如楼上所述,希望可以帮到你
6楼2012-09-15 18:23:33
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cutemm

金虫 (正式写手)

这个 在仪器上可以设置的,滤掉和激发波长相当的散射光就可以了。
7楼2012-09-15 20:08:53
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cutemm

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


soundhorizo: 金币+1, 应助指数+1 2012-09-15 20:11:34
具体怎么设置,你可以查仪器说明书,或者直接找仪器厂家工程师问问即可。一般情况下是设置波长来避开散射光,但是散射太大,比如你这种情况,我觉得滤掉该波长是最好的。
8楼2012-09-15 20:11:09
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dingruicnooc

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 杨晓慧0307 at 2012-09-15 16:28:52
我现在做的实验,散射光拖尾峰对荧光峰的影响,是我遇到的最大的问题,一直没有很好的解决。我试过用滤光片,但是对我的荧光峰也有减弱作用。试过减小激发波长,但是要么还是散射光太强,要么就是我的荧光峰也跟着减 ...

我的载体是二氧化硅,半径比较小只有12nm,也算是固体吧。我也试图减小激发波长,但是和你碰到的问题是一样的。
9楼2012-09-16 08:37:24
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杨晓慧0307

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
soundhorizo: 金币+2, 感谢应助 鼓励交流 ^^ 2012-09-16 09:27:29
引用回帖:
9楼: Originally posted by dingruicnooc at 2012-09-16 08:37:24
我的载体是二氧化硅,半径比较小只有12nm,也算是固体吧。我也试图减小激发波长,但是和你碰到的问题是一样的。...

如果载体是那种透明或半透明状态,光就可以透过去,就没有那么多的散射光进入检测器了,只是这种材质的载体好像比较难办到吧。所以只有在激发和发射波长能离得远点上努力了。
好好学习!
10楼2012-09-16 09:25:51
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