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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 光谱分析 » 请教高人一个荧光和散射的问题
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dingruicnooc

铁虫 (小有名气)

[求助] 请教高人一个荧光和散射的问题

比方说有一个荧光分子，激发波长500nm发射波长550nm,将其标记在一个载体上之后，
这个载体在此激发波长处的散射强度太大了，把荧光的峰都遮盖住了，想问问各位高人
有没有什么办法能避免这个问题呢？我试了在比较短的波长处激发，比方说450nm，散
射峰还是很强以至于荧光的发射峰基本都看不见了。
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1楼 2012-09-14 13:21:10
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gzzhiyoux

金虫 (小有名气)

金虫

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助，欢迎常来分析版交流 ^ ^ 2012-09-14 17:09:28
投机点的办法就是看你散射峰覆盖哪一段，换另外一种最大发射波长比这长或短的荧光分子标记，呵呵！
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自强不息
2楼2012-09-14 15:21:35
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gzzhiyoux

金虫 (小有名气)

金虫

【答案】应助回帖

另外看你那个散射是拉曼散射峰，还是普通反射峰，普通反射一般波长跟入射光波长相等，你可以试试其他大于或小于500nm的入射光激发，荧光发射峰位置不会受影响，可能强弱会跟最大激发（500nm）有点差异，扣空白就没影响了！
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自强不息
3楼2012-09-14 15:25:58
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dingruicnooc

铁虫 (小有名气)
空白扣除也没用啊，散射峰太宽太强，把荧光信号都覆盖住了。
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4楼2012-09-15 10:21:37
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杨晓慧0307

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo: 金币+2 2012-09-15 18:35:47
我现在做的实验，散射光拖尾峰对荧光峰的影响，是我遇到的最大的问题，一直没有很好的解决。我试过用滤光片，但是对我的荧光峰也有减弱作用。试过减小激发波长，但是要么还是散射光太强，要么就是我的荧光峰也跟着减弱以至于看不到。你的载体是固体么？如果是固体，原因就是激发光不能透射过去，只能反射到检测器里面，以至于激发光（就是散射光）的峰太强，会掩盖掉荧光峰。由于解决不了这个问题，我就换了检测对象，努力在寻找激发波长和发射波长相隔比较远的样品，企图让激发光的峰不太容易影响我的荧光峰。所以类推的话，你可不可以换一个激发波长和发射波长离得比较远的载体？
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好好学习！
5楼2012-09-15 16:28:52
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rockyss

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
soundhorizo: 金币+1, 欢迎常来分析版 ^^ 2012-09-15 18:36:07
可以分别扫一下载体和标记分子的吸收谱,看能不能选一个最优波长进行激发,如果不行,就要考虑换标记分子,如楼上所述,希望可以帮到你
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6楼2012-09-15 18:23:33
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cutemm

金虫 (正式写手)
这个 在仪器上可以设置的，滤掉和激发波长相当的散射光就可以了。
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7楼2012-09-15 20:08:53
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cutemm

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
soundhorizo: 金币+1, 应助指数+1 2012-09-15 20:11:34
具体怎么设置，你可以查仪器说明书，或者直接找仪器厂家工程师问问即可。一般情况下是设置波长来避开散射光，但是散射太大，比如你这种情况，我觉得滤掉该波长是最好的。
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8楼2012-09-15 20:11:09
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dingruicnooc

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 杨晓慧0307 at 2012-09-15 16:28:52
我现在做的实验，散射光拖尾峰对荧光峰的影响，是我遇到的最大的问题，一直没有很好的解决。我试过用滤光片，但是对我的荧光峰也有减弱作用。试过减小激发波长，但是要么还是散射光太强，要么就是我的荧光峰也跟着减 ...

我的载体是二氧化硅，半径比较小只有12nm，也算是固体吧。我也试图减小激发波长，但是和你碰到的问题是一样的。
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9楼2012-09-16 08:37:24
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杨晓慧0307

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
soundhorizo: 金币+2, 感谢应助 鼓励交流 ^^ 2012-09-16 09:27:29
引用回帖:
9楼: Originally posted by dingruicnooc at 2012-09-16 08:37:24
我的载体是二氧化硅，半径比较小只有12nm，也算是固体吧。我也试图减小激发波长，但是和你碰到的问题是一样的。...

如果载体是那种透明或半透明状态，光就可以透过去，就没有那么多的散射光进入检测器了，只是这种材质的载体好像比较难办到吧。所以只有在激发和发射波长能离得远点上努力了。
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好好学习！
10楼2012-09-16 09:25:51
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