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dingruicnooc

铁虫 (小有名气)

[求助] 请教高人一个荧光和散射的问题

比方说有一个荧光分子,激发波长500nm发射波长550nm,将其标记在一个载体上之后,
这个载体在此激发波长处的散射强度太大了,把荧光的峰都遮盖住了,想问问各位高人
有没有什么办法能避免这个问题呢?我试了在比较短的波长处激发,比方说450nm,散
射峰还是很强以至于荧光的发射峰基本都看不见了。
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杨晓慧0307

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
soundhorizo: 金币+2 2012-09-15 18:35:47
我现在做的实验,散射光拖尾峰对荧光峰的影响,是我遇到的最大的问题,一直没有很好的解决。我试过用滤光片,但是对我的荧光峰也有减弱作用。试过减小激发波长,但是要么还是散射光太强,要么就是我的荧光峰也跟着减弱以至于看不到。你的载体是固体么?如果是固体,原因就是激发光不能透射过去,只能反射到检测器里面,以至于激发光(就是散射光)的峰太强,会掩盖掉荧光峰。由于解决不了这个问题,我就换了检测对象,努力在寻找激发波长和发射波长相隔比较远的样品,企图让激发光的峰不太容易影响我的荧光峰。所以类推的话,你可不可以换一个激发波长和发射波长离得比较远的载体?
好好学习!
5楼2012-09-15 16:28:52
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gzzhiyoux

金虫 (小有名气)

金虫

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助,欢迎常来分析版交流 ^ ^ 2012-09-14 17:09:28
投机点的办法就是看你散射峰覆盖哪一段,换另外一种最大发射波长比这长或短的荧光分子标记,呵呵!
自强不息
2楼2012-09-14 15:21:35
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gzzhiyoux

金虫 (小有名气)

金虫

【答案】应助回帖

另外看你那个散射是拉曼散射峰,还是普通反射峰,普通反射一般波长跟入射光波长相等,你可以试试其他大于或小于500nm的入射光激发,荧光发射峰位置不会受影响,可能强弱会跟最大激发(500nm)有点差异,扣空白就没影响了!
自强不息
3楼2012-09-14 15:25:58
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dingruicnooc

铁虫 (小有名气)

空白扣除也没用啊,散射峰太宽太强,把荧光信号都覆盖住了。
4楼2012-09-15 10:21:37
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