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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR标曲的问题，跪求大神指点
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wh-joseph

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 荧光定量PCR标曲的问题，跪求大神指点已有1人参与

做相对定量的标曲，一cDNA的PCR产物为标准品，直接稀释到-10次方，但是总出现后面的浓度ct值比前面还小的状况。

荧光定量PCR标曲的问题，跪求大神指点
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荧光定量PCR标曲的问题，跪求大神指点-1
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荧光定量PCR标曲的问题，跪求大神指点-2
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1楼2015-03-29 19:48:36
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR产物Tm值怎么样，是不是小浓度的就不太好了，这样的话是有杂代了。有必要做6个点吗？一般有4个就差不多了吧。
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2楼2015-03-30 09:57:20
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wh-joseph

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2015-03-30 09:57:20
PCR产物Tm值怎么样，是不是小浓度的就不太好了，这样的话是有杂代了。有必要做6个点吗？一般有4个就差不多了吧。

Tm值都是80多，没有杂峰，只有一个峰，引物特异性看起来挺好的。就是浓度低的线性度不好！
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3楼2015-04-01 09:29:31
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wh-joseph at 2015-04-01 09:29:31
Tm值都是80多，没有杂峰，只有一个峰，引物特异性看起来挺好的。就是浓度低的线性度不好！...

我一般就做4个左右的浓度，太低了的话对PCR过程和稀释过程本身的要求都太高了。一般在35循环以后起峰就不可信了不精确了。
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4楼2015-04-01 10:34:46
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