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ngd2013

新虫 (小有名气)

[求助] PCR就是P不出目的片段,急急急! 已有4人参与

我的目的片段:GTGTCAGTCGAGACTAGGAAGATCA  CCAAGGTTCTTGTCGCTAACCGTGGTGAGATTGCAATCCGCGT…………TGTTCTCC  TCGAGATCAAGTAA(1776bp)。我的引物:上CCTACAATCTTTAGAGGAGACACAAC GTGTCAGTCGAGACTAGGAAGATCA,下TGCTCTAGA TTACTTGATCTCGA。
PCR条件1:95度30秒
2: 55度、58度,60度都试过,15秒
3:72度2分30秒
就是P不出目的片段,不知道到底哪里出错了,求救啊!!!
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一开始95度5min和最后的72度10min 有么?
5楼2015-03-18 09:14:20
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这引物也太长了吧。。。一般引物大小不是18-25bp么
2楼2015-03-18 09:06:13
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

上游引物那是两种么?。。。一开始还以为是一条那么长。。。
3楼2015-03-18 09:07:14
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ngd2013

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gnot_nail at 2015-03-18 09:07:14
上游引物那是两种么?。。。一开始还以为是一条那么长。。。

上游引物就是一条,我P出该片段,然后做重叠PCR的,这是下游片段
4楼2015-03-18 09:09:53
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