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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR就是P不出目的片段，急急急！
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ngd2013

新虫 (小有名气)

[求助] PCR就是P不出目的片段，急急急！ 已有4人参与

我的目的片段：GTGTCAGTCGAGACTAGGAAGATCA  CCAAGGTTCTTGTCGCTAACCGTGGTGAGATTGCAATCCGCGT…………TGTTCTCC  TCGAGATCAAGTAA（1776bp）。我的引物:上CCTACAATCTTTAGAGGAGACACAAC GTGTCAGTCGAGACTAGGAAGATCA，下TGCTCTAGA TTACTTGATCTCGA。
PCR条件1：95度30秒
2: 55度、58度，60度都试过，15秒
3:72度2分30秒
就是P不出目的片段，不知道到底哪里出错了，求救啊！！！
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1楼 2015-03-17 21:33:46
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ngd2013

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gnot_nail at 2015-03-18 09:07:14
上游引物那是两种么？。。。一开始还以为是一条那么长。。。

上游引物就是一条，我P出该片段，然后做重叠PCR的，这是下游片段
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4楼2015-03-18 09:09:53
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这引物也太长了吧。。。一般引物大小不是18-25bp么
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2楼2015-03-18 09:06:13
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

上游引物那是两种么？。。。一开始还以为是一条那么长。。。
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3楼2015-03-18 09:07:14
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一开始95度5min和最后的72度10min 有么？
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5楼2015-03-18 09:14:20
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