24小时热门版块排行榜    

查看: 3135  |  回复: 6

羲和羲羲和

金虫 (小有名气)

[求助] WB蛋白显影结果问题求助 已有2人参与

蛋白显影后,胶片上有的地方空白,什么都没有,背景没有,也没有条带。到底是什么原因呢?
第一次显影后结果不理想,出现上述现象,无法观察整行条带。。
之后,用stripping buffer 洗了之后,重新孵育一抗二抗,显影后,发现之前有些空白的地方又有了背景,这就说明空白不是转膜之前决定的呀,一抗二抗也是无气泡孵育呀,难道是显影时有气泡吗?可是,显影时候的气泡是必须得仔细排掉的。玻板下面若是有发光液浸入有气泡是不影响的,有验证过,那还有什么原因呢?。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuzijack

铜虫 (文坛精英)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议确定二抗是否过期,就是直接用二抗来显影,如果可以再验证一抗与二抗的结合,即将一抗固定于膜上然后加二抗,如此类推,一步步找到原因
2楼2015-03-18 16:30:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

羲和羲羲和

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhuzijack at 2015-03-18 16:30:42
建议确定二抗是否过期,就是直接用二抗来显影,如果可以再验证一抗与二抗的结合,即将一抗固定于膜上然后加二抗,如此类推,一步步找到原因

谢谢回复。
如果二抗过期不是没有和一抗结合吗?那不就显不出东西吗?我这是片上不定点有空白呀。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-03-19 08:41:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

奋进的女孩

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 羲和羲羲和 at 2015-03-19 08:41:06
谢谢回复。
如果二抗过期不是没有和一抗结合吗?那不就显不出东西吗?我这是片上不定点有空白呀。
...

我也想知道原因是什么造成的???
4楼2015-07-24 12:16:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1510050322

银虫 (初入文坛)

有可能是显影定影液的问题吧。
5楼2015-07-30 18:41:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huiting410

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

显影液有问题,下次先用一个已知蛋白做个对照,如果已知蛋白都做不出来就一定是显影液的问题。而且第一次曝光都什么也没有,就没必要strip了,你strip后有背景很显然就是没洗干净。
6楼2015-07-31 05:40:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

羲和羲羲和

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by huiting410 at 2015-07-31 05:40:26
显影液有问题,下次先用一个已知蛋白做个对照,如果已知蛋白都做不出来就一定是显影液的问题。而且第一次曝光都什么也没有,就没必要strip了,你strip后有背景很显然就是没洗干净。

是不定点的空白不是大片空白。

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-07-31 09:09:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 羲和羲羲和 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 08工学调剂 +13 用户573181 2026-03-20 18/900 2026-03-25 22:00 by zbssa
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 食品专硕 一志愿双一流 328 +3 xiaom99 2026-03-21 4/200 2026-03-24 21:20 by lailaisimei
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考博] 申博26年 +4 八6八68 2026-03-19 4/200 2026-03-24 15:49 by 小Ben呵呵
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +7 vv迷 2026-03-22 7/350 2026-03-23 23:44 by Txy@872106
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 一志愿华中科技大学071000,求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 一志愿南昌大学,327分,材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
信息提示
请填处理意见