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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 某一特定蛋白的磷酸化位点确定
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wulaer

铁虫 (小有名气)

[求助] 某一特定蛋白的磷酸化位点确定

各位大神：
       我想做一下病毒中某一蛋白的磷酸化位点，之前已有人用32P放射显影证明该蛋白确实有磷酸化。请问下，我用质谱做的话该用什么质谱？最重要的是我到底有没有必要纯化该蛋白再去做质谱？如果只是用SDS-PAGE分离一下，可不可以满足质谱磷酸化位点鉴定？感谢大家的帮忙，跪谢。
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1楼2013-07-25 10:08:10
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-25 12:51:20
SDS-PAGE染色后能确定目标蛋白条带，可以不用纯化蛋白，直接切胶条消化打质谱。
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2楼2013-07-25 12:21:13
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wulaer

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-25 12:21:13
SDS-PAGE染色后能确定目标蛋白条带，可以不用纯化蛋白，直接切胶条消化打质谱。

那会不会有蛋白信号覆盖的问题？好像有文献这么说
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3楼2013-07-25 14:27:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wulaer at 2013-07-25 14:27:15
那会不会有蛋白信号覆盖的问题？好像有文献这么说...

所以要看你的目标蛋白的丰度、胶上的位置是否还有很多杂蛋白。
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4楼2013-07-26 00:50:31
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wulaer

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-26 00:50:31
所以要看你的目标蛋白的丰度、胶上的位置是否还有很多杂蛋白。...

还想问下：打质谱前，蛋白染色的试剂要不要求色谱或质谱级？谢谢
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5楼2013-07-26 20:19:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wulaer: 金币+7, ★有帮助, 实用，很感谢 2013-07-27 00:49:57
引用回帖:
5楼: Originally posted by wulaer at 2013-07-26 20:19:40
还想问下：打质谱前，蛋白染色的试剂要不要求色谱或质谱级？谢谢...

染色时不用。切胶条后用的试剂需要。
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6楼2013-07-26 22:31:25
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