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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » WB蛋白显影结果问题求助
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羲和羲羲和

金虫 (小有名气)

[求助] WB蛋白显影结果问题求助已有2人参与

蛋白显影后，胶片上有的地方空白，什么都没有，背景没有，也没有条带。到底是什么原因呢？
第一次显影后结果不理想，出现上述现象，无法观察整行条带。。
之后，用stripping buffer 洗了之后，重新孵育一抗二抗，显影后，发现之前有些空白的地方又有了背景，这就说明空白不是转膜之前决定的呀，一抗二抗也是无气泡孵育呀，难道是显影时有气泡吗？可是，显影时候的气泡是必须得仔细排掉的。玻板下面若是有发光液浸入有气泡是不影响的，有验证过，那还有什么原因呢？。。
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1楼2015-03-17 21:19:46
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zhuzijack

铜虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议确定二抗是否过期，就是直接用二抗来显影，如果可以再验证一抗与二抗的结合，即将一抗固定于膜上然后加二抗，如此类推，一步步找到原因
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2楼2015-03-18 16:30:42
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羲和羲羲和

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhuzijack at 2015-03-18 16:30:42
建议确定二抗是否过期，就是直接用二抗来显影，如果可以再验证一抗与二抗的结合，即将一抗固定于膜上然后加二抗，如此类推，一步步找到原因

谢谢回复。
如果二抗过期不是没有和一抗结合吗？那不就显不出东西吗？我这是片上不定点有空白呀。

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3楼2015-03-19 08:41:06
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奋进的女孩

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 羲和羲羲和 at 2015-03-19 08:41:06
谢谢回复。
如果二抗过期不是没有和一抗结合吗？那不就显不出东西吗？我这是片上不定点有空白呀。
...

我也想知道原因是什么造成的？？？
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4楼2015-07-24 12:16:04
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1510050322

银虫 (初入文坛)
有可能是显影定影液的问题吧。
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5楼2015-07-30 18:41:41
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huiting410

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

显影液有问题，下次先用一个已知蛋白做个对照，如果已知蛋白都做不出来就一定是显影液的问题。而且第一次曝光都什么也没有，就没必要strip了，你strip后有背景很显然就是没洗干净。
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6楼2015-07-31 05:40:26
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羲和羲羲和

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by huiting410 at 2015-07-31 05:40:26
显影液有问题，下次先用一个已知蛋白做个对照，如果已知蛋白都做不出来就一定是显影液的问题。而且第一次曝光都什么也没有，就没必要strip了，你strip后有背景很显然就是没洗干净。

是不定点的空白不是大片空白。

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7楼2015-07-31 09:09:58
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