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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用genomic DNA 为模板做PCR，为什么有的时候能p出来有的时候不能？求指导
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诺诺不可欺

银虫 (初入文坛)

[求助] 用genomic DNA 为模板做PCR，为什么有的时候能p出来有的时候不能？求指导已有6人参与

PCR条件相同，原料相同，也做过梯度的，为什么之前能p出来，现在是怎么也p不出来?

用genomic DNA 为模板做PCR，为什么有的时候能p出来有的时候不能？求指导
2014-12 扩增.jpg


用genomic DNA 为模板做PCR，为什么有的时候能p出来有的时候不能？求指导-1
2015-1  DNA 扩增.jpg
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1楼2015-03-14 09:10:52
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
诺诺不可欺: 金币+1 2015-03-15 21:33:30
你这结果图，什么条带也没有，看看退火温度是不是过高，加样的时候是否确定加入，引物有没有问题，等等一些小细节吧
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2楼2015-03-14 09:37:21
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
诺诺不可欺: 金币+1 2015-03-15 21:33:38
用高保真酶，优化引物退火温度
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3楼2015-03-14 11:27:33
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
诺诺不可欺: 金币+1 2015-03-15 21:33:53
模板会不会降解了？之前成功是多久之前的，会不会模板本身浓度低然后没保存好，就降解了。
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4楼2015-03-14 13:21:12
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诺诺不可欺

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2015-03-14 11:27:33
用高保真酶，优化引物退火温度

用的是高保真的酶，退火温度从45，50，55，58，60都试过了都没有P出来
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5楼2015-03-15 21:27:53
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诺诺不可欺

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gnot_nail at 2015-03-14 13:21:12
模板会不会降解了？之前成功是多久之前的，会不会模板本身浓度低然后没保存好，就降解了。

不应该，我重新提取过一次模板了也没p出来
我再跑个电泳看看模板试试
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6楼2015-03-15 21:31:16
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诺诺不可欺

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 一砖头飘死 at 2015-03-14 09:37:21
你这结果图，什么条带也没有，看看退火温度是不是过高，加样的时候是否确定加入，引物有没有问题，等等一些小细节吧

退火温度从45，50，55，58，60都试过了都没出来
但是之前是58度P出来的
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7楼2015-03-15 21:33:20
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板降解
试剂过期或者污染（酶的选择也是一方面 建议热启动酶，高保真酶如果扩增没有针对一个碱基的，一般不要用，可能会降解模板）
如果梯度已经尝试多次还没有成功，就放弃。赶快考虑其他因素
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
8楼2015-03-16 10:57:01
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yuman0709

铁虫 (初入文坛)
我现在也是这个问题，不知咋办？
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9楼2015-03-17 08:49:17
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焦卓磊

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
诺诺不可欺: 金币+1, ★有帮助 2015-05-13 08:22:50
我当时做了个镁离子浓度梯度，就扩出来了

[ 发自小木虫客户端 ]
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为自己未来奋斗
10楼2015-03-17 09:21:13
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