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诺诺不可欺

银虫 (初入文坛)

[求助] 用genomic DNA 为模板做PCR，为什么有的时候能p出来有的时候不能？求指导 已有6人参与

PCR条件相同，原料相同，也做过梯度的，为什么之前能p出来，现在是怎么也p不出来?

用genomic DNA 为模板做PCR，为什么有的时候能p出来有的时候不能？求指导
2014-12 扩增.jpg


用genomic DNA 为模板做PCR，为什么有的时候能p出来有的时候不能？求指导-1
2015-1  DNA 扩增.jpg
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1楼 2015-03-14 09:10:52
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板降解
试剂过期或者污染（酶的选择也是一方面 建议热启动酶，高保真酶如果扩增没有针对一个碱基的，一般不要用，可能会降解模板）
如果梯度已经尝试多次还没有成功，就放弃。赶快考虑其他因素
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
8楼2015-03-16 10:57:01
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
诺诺不可欺: 金币+1 2015-03-15 21:33:30
你这结果图，什么条带也没有，看看退火温度是不是过高，加样的时候是否确定加入，引物有没有问题，等等一些小细节吧
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2楼2015-03-14 09:37:21
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
诺诺不可欺: 金币+1 2015-03-15 21:33:38
用高保真酶，优化引物退火温度
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3楼2015-03-14 11:27:33
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
诺诺不可欺: 金币+1 2015-03-15 21:33:53
模板会不会降解了？之前成功是多久之前的，会不会模板本身浓度低然后没保存好，就降解了。
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4楼2015-03-14 13:21:12
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