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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组蛋白的表达
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lxl1213

新虫 (小有名气)

[求助] 重组蛋白的表达 已有1人参与

我想用pet28a来表达重组蛋白，我的目的基因是请生物公司来化学合成的，目的基因本身最后一个密码子是TAA，然后我们人为的在前面加了一个ATG，这样的话我们能把pet28a本身的his标签表达连接在重组蛋白上吗？我们打算请生物公司合成的时候就在目的基因两端加上酶切位点序列，以便将其从生物公司的T载上切下来连接到pet28a上，酶切位点的选择跟his标签有关系吗？
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1楼 2015-03-11 11:36:17
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lxl1213: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢，对于我们新手很有帮助 2015-03-12 16:57:24
有，酶切位点要在标签前面，ATG也要在标签前面，楼主需要仔细分析下pet28a图谱。
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-03-11 12:16:01
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lxl1213

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-11 12:16:01
有，酶切位点要在标签前面，ATG也要在标签前面，楼主需要仔细分析下pet28a图谱。

但是我自己的目的基因有ATG,然后载体上面也有ATG，那它是从哪里开始呢？pet28a带有两个his标签，一个是在270-287，一个是在140-157，然后我想选的双酶切是HindIII在174和BamHI在199，可以吗？
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3楼2015-03-11 14:10:19
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781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxl1213 at 2015-03-11 14:10:19
但是我自己的目的基因有ATG,然后载体上面也有ATG，那它是从哪里开始呢？pet28a带有两个his标签，一个是在270-287，一个是在140-157，然后我想选的双酶切是HindIII在174和BamHI在199，可以吗？...

rbs后面NCOI上的ATG为开始密码子，后面的ATG一般都不以启始密码子表达。BamHI换成NDEI,注意氨基酸错码，用N段的his标签，纯化后可以用凝血酶切掉。后面的his标签可以加不用。
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-03-11 14:30:47
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lxl1213

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-11 14:30:47
rbs后面NCOI上的ATG为开始密码子，后面的ATG一般都不以启始密码子表达。BamHI换成NDEI,注意氨基酸错码，用N段的his标签，纯化后可以用凝血酶切掉。后面的his标签可以加不用。...

不好意思啊，错码是怎么看的啊？我是第一次用NTI，不太懂
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5楼2015-03-15 14:18:00
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781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lxl1213 at 2015-03-15 14:18:00
不好意思啊，错码是怎么看的啊？我是第一次用NTI，不太懂...

就是看氨基酸的序列是否正确，用软件翻译核甘酸。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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采菊东篱下，悠然见南山。
6楼2015-03-15 14:45:52
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