应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组蛋白的表达
61/1返回列表
查看: 871  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lxl1213

新虫 (小有名气)

[求助] 重组蛋白的表达 已有1人参与

我想用pet28a来表达重组蛋白，我的目的基因是请生物公司来化学合成的，目的基因本身最后一个密码子是TAA，然后我们人为的在前面加了一个ATG，这样的话我们能把pet28a本身的his标签表达连接在重组蛋白上吗？我们打算请生物公司合成的时候就在目的基因两端加上酶切位点序列，以便将其从生物公司的T载上切下来连接到pet28a上，酶切位点的选择跟his标签有关系吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-03-11 11:36:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lxl1213: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢，对于我们新手很有帮助 2015-03-12 16:57:24
有，酶切位点要在标签前面，ATG也要在标签前面，楼主需要仔细分析下pet28a图谱。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-03-11 12:16:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxl1213

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-11 12:16:01
有，酶切位点要在标签前面，ATG也要在标签前面，楼主需要仔细分析下pet28a图谱。

但是我自己的目的基因有ATG,然后载体上面也有ATG，那它是从哪里开始呢？pet28a带有两个his标签，一个是在270-287，一个是在140-157，然后我想选的双酶切是HindIII在174和BamHI在199，可以吗？
赞一下 回复此楼
3楼2015-03-11 14:10:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxl1213 at 2015-03-11 14:10:19
但是我自己的目的基因有ATG,然后载体上面也有ATG，那它是从哪里开始呢？pet28a带有两个his标签，一个是在270-287，一个是在140-157，然后我想选的双酶切是HindIII在174和BamHI在199，可以吗？...

rbs后面NCOI上的ATG为开始密码子，后面的ATG一般都不以启始密码子表达。BamHI换成NDEI,注意氨基酸错码，用N段的his标签，纯化后可以用凝血酶切掉。后面的his标签可以加不用。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-03-11 14:30:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxl1213

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-11 14:30:47
rbs后面NCOI上的ATG为开始密码子，后面的ATG一般都不以启始密码子表达。BamHI换成NDEI,注意氨基酸错码，用N段的his标签，纯化后可以用凝血酶切掉。后面的his标签可以加不用。...

不好意思啊，错码是怎么看的啊？我是第一次用NTI，不太懂
赞一下 回复此楼
5楼2015-03-15 14:18:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lxl1213 at 2015-03-15 14:18:00
不好意思啊，错码是怎么看的啊？我是第一次用NTI，不太懂...

就是看氨基酸的序列是否正确，用软件翻译核甘酸。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
6楼2015-03-15 14:45:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lxl1213 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 理学，工学，农学调剂，少走弯路，这里欢迎您！ +3 likeihood 2026-03-02 5/250 2026-03-02 16:37 by ZRH_878
[考研] 一志愿华南理工大学材料与化工326分，求调剂 +3 wujinrui1 2026-02-28 3/150 2026-03-02 16:36 by chuocheng
[考研] 求调剂 +9 yunziaaaaa 2026-03-01 10/500 2026-03-02 15:18 by 半截的诗0927
[考研] 0856调剂 +7 刘梦微 2026-02-28 7/350 2026-03-02 14:11 by liyongv
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 9/450 2026-03-02 13:31 by njzyff
[考研] 材料与化工328求调剂 +3 。，。，。，。i 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:09 by houyaoxu
[考研] 292求调剂 +7 yhk_819 2026-02-28 7/350 2026-03-02 12:43 by 无际的草原
[考研] 材料工程274求调剂 +4 Lilithan 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:06 by yuchj
[考研] 276求调剂 +4 路lyh123 2026-02-28 5/250 2026-03-02 11:20 by yuchj
[基金申请] 此成果不能导入原因：元数据必填信息不完整，可 进行补充。 +4 Kittylucky 2026-03-02 5/250 2026-03-02 11:07 by jurkat.1640
[考研] 材料工程专硕283求调剂 5+4 ，！？ 2026-03-02 6/300 2026-03-02 11:07 by 黑！在干嘛
[考研] 0856材料调剂 +4 沿岸有贝壳OUC 2026-03-02 4/200 2026-03-02 10:19 by 公瑾逍遥
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-02 4/200 2026-03-02 10:16 by 13853210211
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭