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guoguo201209

新虫 (小有名气)

[求助] 为何有的PCR实验,延伸温度用60度? 已有3人参与

查阅了相关文献,同一种酶,为何扩增一对引物用的延伸温度是68度,而扩增另一对引物强调延伸温度是60度才能扩增出来。延伸温度不是根据酶来确定的吗?为何要改变才能扩增出来呢?求大侠指点
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hkj710

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

其实,TAQ酶在一般的37度到90度都有活性,有的PROTOCOL设置的延伸温度和退火温度结合在一起,节省时间,还能提高特异性
8楼2015-03-18 05:06:31
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lovelydong

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
guoguo201209(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-03-02 19:39:48
PCR的延伸温度是由引物来决定的,引物的长短、GC的含量都会影响到退火温度。在设计引物时候,设计软件就会帮助计算出延伸温度。但是延伸温度要接近酶的活性温度,才能保证高效扩增。所有在设计引物时候要考虑到。
2楼2015-03-02 17:31:24
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
延伸温度由引物决定,PCR中,只要酶用的好,设计引物的时候则无需考虑酶的问题。酶的活性温度不需要考虑,因为用于PCR的酶起码的条件也是耐热酶(普通Taq或热启动Taq酶),不然怎么扩增呢
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-03-03 09:50:31
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guoguo201209

新虫 (小有名气)

各位大侠说的是退火温度由引物决定的,我现在问的是延伸温度,也跟引物有关?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2015-03-03 15:24:28
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