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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为何有的PCR实验，延伸温度用60度？
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guoguo201209

新虫 (小有名气)

[求助] 为何有的PCR实验，延伸温度用60度？ 已有3人参与

查阅了相关文献，同一种酶，为何扩增一对引物用的延伸温度是68度，而扩增另一对引物强调延伸温度是60度才能扩增出来。延伸温度不是根据酶来确定的吗？为何要改变才能扩增出来呢？求大侠指点
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1楼 2015-03-02 15:00:04
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hkj710

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

其实，TAQ酶在一般的37度到90度都有活性，有的PROTOCOL设置的延伸温度和退火温度结合在一起，节省时间，还能提高特异性
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8楼2015-03-18 05:06:31
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lovelydong

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
guoguo201209(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-03-02 19:39:48
PCR的延伸温度是由引物来决定的，引物的长短、GC的含量都会影响到退火温度。在设计引物时候，设计软件就会帮助计算出延伸温度。但是延伸温度要接近酶的活性温度，才能保证高效扩增。所有在设计引物时候要考虑到。
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2楼2015-03-02 17:31:24
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
延伸温度由引物决定，PCR中，只要酶用的好，设计引物的时候则无需考虑酶的问题。酶的活性温度不需要考虑，因为用于PCR的酶起码的条件也是耐热酶（普通Taq或热启动Taq酶），不然怎么扩增呢
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-03-03 09:50:31
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guoguo201209

新虫 (小有名气)
各位大侠说的是退火温度由引物决定的，我现在问的是延伸温度，也跟引物有关？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-03-03 15:24:28
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