24小时热门版块排行榜    

查看: 2208  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

雪中花sml

新虫 (小有名气)

[求助] PCR退火温度设置 已有7人参与

目前做PCR扩增,由于目的基因(1300bp)前面一段GC含量比较高的问题,设置的两条引物,其中一条GC%为80%,Tm为77.7,另一条GC%为45%,Tm为54.3,以大家的经验觉得用这两条引物扩增目的基因的退火温度应该设置为多少呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

向着前方迈进
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rv1nm2y

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
雪中花sml(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-06 20:50:20
可以设置一个梯度PCR,并且有的时候扩增与退火温度没有太大关系,只要合适区间都可以扩出来。
5楼2015-02-06 09:51:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
雪中花sml(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-05 22:01:26
为何不缩短上游引物长度,加长下游引物长度,看能否接近点?
2楼2015-02-05 19:27:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
60度.特异性好的话,退火温度只能排第二.

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
采菊东篱下,悠然见南山。
3楼2015-02-05 23:14:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chibang1220

木虫 (著名写手)


雪中花sml(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-06 20:50:13
为什么要把引物设计成这样?引物长度在25-35bp特异性都是可以的,在这个范围内你可以修改2条引物使其Tm值相近,PCR时选择合适的退火温度。你是不是追求2条引物一样长了啊?而且你目的基因才1300bp我觉得即使引物长度20bp特异性应该也不会太差(个人意见)
人的差别在于业余时间
4楼2015-02-06 08:54:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 帮忙看看fileCode +4 wwncly 2026-08-10 8/400 2026-08-10 22:07 by demonstreets
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +3 Tide man 2026-08-10 3/150 2026-08-10 21:48 by GZUZM
[基金申请] filecode +8 documentary 2026-08-10 8/400 2026-08-10 19:20 by loufangrui
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
请填处理意见