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默默2013

新虫 (小有名气)

[求助] 请教大家质粒构建问题 已有3人参与

这个我用的质粒的大致图
请教大家质粒构建问题
下面这个是我打算构建成的质粒
请教大家质粒构建问题-1

就是在启动子和终止子中间的多克隆位点处添加两个片段,第一个片段通过xba1和hind3双酶切之后连接B片段,之后再使用xba1酶切,连接上另一个A片段,这两个片段是根据NCBI上查询的序列pcr扩增到的,扩增的CDS区,从ATG起始密码子开始的片段,并添加了酶切位点和保护碱基,添加的片段是真核基因上的,不知道这样两个片段都在多克隆位点处 ,这样能不能表达呢,不是要两个基因融合表达,是分别表达的,要不要考虑移码问题呢,请大家指教,谢谢。
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果A有终止密码子的话,B应该表达不出来吧,没法翻译吧。如果A没终止密码子的话,肯定融合了。不知道你要做什么,可以融合的位置加一个蛋白酶位点,就可以融合表达后,再把他们切开。
3楼2015-02-04 10:09:17
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zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
默默2013(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-03 22:15:25
需要考虑移码,阅读框必须计算准确。
永远相信未知的总是美好的!
2楼2015-02-03 16:31:53
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
恩,融合表达的可能性极高。方法是可行的。
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2015-02-04 10:22:14
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