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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 请教大家质粒构建问题
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默默2013

新虫 (小有名气)

[求助] 请教大家质粒构建问题 已有3人参与

这个我用的质粒的大致图
请教大家质粒构建问题
下面这个是我打算构建成的质粒
请教大家质粒构建问题-1

就是在启动子和终止子中间的多克隆位点处添加两个片段，第一个片段通过xba1和hind3双酶切之后连接B片段，之后再使用xba1酶切，连接上另一个A片段，这两个片段是根据NCBI上查询的序列pcr扩增到的，扩增的CDS区，从ATG起始密码子开始的片段，并添加了酶切位点和保护碱基，添加的片段是真核基因上的，不知道这样两个片段都在多克隆位点处 ，这样能不能表达呢，不是要两个基因融合表达，是分别表达的，要不要考虑移码问题呢，请大家指教，谢谢。
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1楼 2015-02-03 13:52:15
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zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
默默2013(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-03 22:15:25
需要考虑移码，阅读框必须计算准确。
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永远相信未知的总是美好的！
2楼2015-02-03 16:31:53
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果A有终止密码子的话，B应该表达不出来吧，没法翻译吧。如果A没终止密码子的话，肯定融合了。不知道你要做什么，可以融合的位置加一个蛋白酶位点，就可以融合表达后，再把他们切开。
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3楼2015-02-04 10:09:17
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
恩，融合表达的可能性极高。方法是可行的。
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-02-04 10:22:14
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