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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 关于荧光绝对定量的定性问题？
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美琪琪

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于荧光绝对定量的定性问题？

各位大神，请问有谁知道荧光绝对定量怎样定阴阳性啊？ps：用 荧光绝对定量的目的是测病毒的含量。谢谢!
!
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1楼 2015-02-02 15:36:43
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JNVBNC

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-02-03 11:25:34
如果是SYBR Green，一般跑40个cycle，Ct大于35就认为是阴性；如果是TaqMan，有就是有，没有就没有。
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2楼2015-02-03 05:20:43
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bbbobo

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-02-03 11:25:37
如果你只是要定性判断阴阳性，看是否有S形扩增曲线，以及CT值的大小；如果你是要绝对定量，那就得建立梯度的标准曲线才行
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3楼2015-02-03 09:39:39
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美琪琪

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by JNVBNC at 2015-02-03 05:20:43
如果是SYBR Green，一般跑40个cycle，Ct大于35就认为是阴性；如果是TaqMan，有就是有，没有就没有。

你好，你的这个结论我也知道，但是我的实验方案里有个实验组（攻毒组）和对照组（用灭菌水），用SYBR Green，跑40个循环，但不管是实验组和对照组CQ值都都在20<CQ<30这个范围之间，所以说难到我了。大神有好的方法没呀。
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4楼2015-02-05 16:29:47
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美琪琪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bbbobo at 2015-02-03 09:39:39
如果你只是要定性判断阴阳性，看是否有S形扩增曲线，以及CT值的大小；如果你是要绝对定量，那就得建立梯度的标准曲线才行

跑的对照组和实验组都有s形扩增曲线了，CT值都在20<CQ<30范围之间。   标准曲线我已经建立了的，但是感觉没什么用啊，因为仪器能读出CQ值啊。
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5楼2015-02-05 16:33:09
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JNVBNC

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 美琪琪 at 2015-02-05 16:29:47
你好，你的这个结论我也知道，但是我的实验方案里有个实验组（攻毒组）和对照组（用灭菌水），用SYBR Green，跑40个循环，但不管是实验组和对照组CQ值都都在20<CQ<30这个范围之间，所以说难到我了。大神有好 ...

我可不可以这样理解，你其实是想比较处理与非处理的差异，在相同的取样条件下，谁的Cq小，谁就带毒多呀，用2--ΔΔCt的方法不可以比较吗？
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6楼2015-02-07 02:42:32
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美琪琪

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by JNVBNC at 2015-02-07 02:42:32
我可不可以这样理解，你其实是想比较处理与非处理的差异，在相同的取样条件下，谁的Cq小，谁就带毒多呀，用2--ΔΔCt的方法不可以比较吗？...

我的目的就是想知道处理过后的样品与非处理过后，相同取样条件下，处理过后的样品组织中，哪些组织含毒，哪些不含毒，含毒的具体含了多少个拷贝数。这个好想只能用绝对定量来比较。而你的2--ΔΔCt法是关于相对定量的。
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7楼2015-02-09 18:20:39
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