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[交流]
大分子量蛋白WESTERN BLOT问题讨论与求助
请问，有没有人做过140-220KD的蛋白，大概条件是什么样的？需要注意什么？
我现在做140KD-220KD蛋白，一直做不出来，但是GAPDH还是可以出来。刚开始转膜不好，现在转膜后，GEL考染后基本都转到了膜上，但是目的蛋白依旧没条带，泳道曝光长了就全部糊掉，感觉有又是没有。
现在想问的问题是：1、β-巯基乙醇的浓度加错了，会不会造成蛋白分不开？比如38KD和42KD的就会连上？单独孵育两个抗体，相同的位置都有条带，一起孵育的话，条带加粗。
2、β-巯基乙醇的浓度会不会是造成泳道糊掉的原因？
3、在pcr仪中denature是不是不彻底？95° 6min
ps:一抗没问题，浓度也加大了。并且应该是有目的蛋白的。
求大神指点，万分的感谢！！！ |
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